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关键词： 脂肪间充质干细胞   血管平滑肌细胞   诱导分化   雌性   雄性   小口径人工血管  

摘要： 背景:在血管壁结构中,血管平滑肌细胞通过调节血管张力维持压力稳定,确保组织血液供应。血管平滑肌细胞具有高度可塑性,是血管再生的关键细胞类型。然而,成熟的血管平滑肌细胞难以获取且体外扩增能力有限。相比之下,脂肪间充质干细胞易于获取、扩增能力强,并具备向血管平滑肌细胞分化的潜能。目前,雌雄来源脂肪间充质干细胞的代谢活性、增殖、集落形成等生物学特性及向血管平滑肌细胞分化的能力是否存在差异仍需深入研究。目的:比较雌性和雄性大鼠脂肪间充质干细胞的代谢活性、增殖、分化能力等生物学特征及向血管平滑肌细胞分化潜能的差异。方法:①分别从雌、雄大鼠腹股沟区获取脂肪组织,采用胶原酶消化法提取脂肪间充质干细胞,通过流式细胞术检测表面抗原(CD90、CD29、CD45),并利用WST-1实验、细胞倍增实验、集落形成实验及成脂、成骨、成软骨分化实验比较雌雄大鼠脂肪间充质干细胞的生物学特征。②用5 ng/mL转化生长因子β诱导雌雄大鼠脂肪间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化,通过qRT-PCR检测α-SMA、SM22α、Calponin、Caldesmon、SMMHC、Smoothelin基因表达,免疫荧光染色检测α-SMA、Caldesmon、Smoothelin蛋白表达,并通过胶原晶格收缩实验评估血管平滑肌细胞的收缩功能。结果与结论:①原代培养3 d后,显微镜下观察雌性和雄性大鼠脂肪干细胞形态均一,呈纺锤状;②流式细胞术检测大鼠脂肪间充质干细胞高表达CD90、CD29,低表达CD45;③与雄性大鼠脂肪间充质干细胞相比,雌性大鼠脂肪间充质干细胞代谢活性更好(P<0.05);④雌性和雄性大鼠脂肪间充质干细胞在倍增时间、集落形成、成脂、成骨、成软骨分化能力方面相似;⑤向血管平滑肌细胞诱导分化后,在基因层面,相较于雄性大鼠脂肪间充质干细胞,雌性大鼠脂肪间充质干细胞α-SMA、Caldesmon和SMMHC高表达(P<0.05);在蛋白层面,相较于雄性大鼠脂肪间充质干细胞,雌性大鼠脂肪间充质干细胞α-SMA高表达(P<0.05);在收缩功能层面,雌性和雄性大鼠脂肪间充质干细胞在收缩功能上相似。由此可见,在代谢活性和向血管平滑肌细胞分化方面,雌性大鼠脂肪间充质干细胞更有优势。

关键词： 间充质干细胞   动脉粥样硬化   下肢动脉硬化闭塞症   溃疡愈合   外泌体   临床疗效   Meta分析   随机对照试验  

摘要： 目的:系统评价间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效。方法:计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、Scopus、Google Schola、中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库,检索间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的随机对照试验,检索时限均从各数据库建库至2024年7月。按照制定的纳入和排除标准进行文献筛选、提取相关资料。使用RevMan 5.3软件对纳入文献进行Meta分析,包括截肢率、无截肢生存率、溃疡愈合率、踝肱指数、经皮氧分压以及无痛行走距离。结果:共纳入9个随机对照试验。Meta分析结果显示:与对照组比较,间充质干细胞治疗组患者无截肢生存率[RR=1.23,95%CI(1.07,1.42),P=0.004]、截肢率[RR=0.55,95%CI(0.35,0.85),P=0.007]、溃疡愈合率[RR=1.95,95%CI(1.51,2.52),P<0.001]、踝肱指数[MD=0.16,95%CI(0.13,0.19),P<0.001]、经皮氧分压[SMD=1.62,95%CI(0.87,2.37),P<0.001]以及无痛行走距离[MD=131.81,95%CI(3.56,260.06),P=0.04]均有显著改善,但死亡率[RR=1.13,95%CI(0.62,2.06),P=0.68]差异无显著性意义。结论:间充质干细胞对下肢动脉硬化闭塞症的部分临床指标有改善趋势。但由于纳入文献的局限性,未来尚需更多高质量、多中心、大样本的随机对照试验验证。

关键词： 豌豆蛋白   易吞咽   水凝胶   质地   3D打印  

摘要： 为应对全球老龄化趋势加剧所带来的吞咽障碍人群增加问题,提升该群体饮食的安全性与适口性,本研究旨在构建基于豌豆蛋白(Pea protein,PP)协同多糖的3D打印复合水凝胶,用于开发适合吞咽障碍患者的易吞咽食品。选取卡拉胶(κ-Carrageenan,Car)、玉米淀粉(Corn starch,CS)和海藻酸钠(Sodium alginate,SA)分别与PP复配,制备三种可3D打印的复合油墨(PP-Car、PP-CS和PP-SA),系统探究其流变学特性、质构特性、可打印性及吞咽特性。结果显示,三种复合油墨均表现出剪切变稀行为和良好的触变恢复性能,适用于挤出式3D打印。随多糖添加量的增加,油墨的黏度和储能模量(G')显著提升,形成的复合水凝胶硬度也增加(PP-1.5%Car-G、PP-15.0%CS-G和PP-1.5%SA-G的硬度分别为626.49、790.67和287.85 g),表明凝胶结构增强。3D打印测试中,PP-Car和PP-CS油墨打印结构完整,纹理清晰,结构保持性优于PP-SA。吞咽性能方面,经A/IDDSI方法测定,所有水凝胶均符合IDDSI 7级范畴,属于常规易咀嚼质地范畴。本研究成功构建了三种具有良好3D打印适应性与吞咽性能的植物蛋白基复合水凝胶体系,为基于个性化3D打印易吞咽食品的开发提供了参考。

关键词： 模仿学习   行为克隆   复合误差   二次学习   信息提取  

摘要： 在行为克隆这一模仿学习方法中,智能体遇到专家数据中不包含的状态会随机采取行动,导致与专家策略产生偏移。这种现象被称为复合误差,是影响行为克隆性能的重要因素。为解决这一问题,首先说明行为克隆本质是二次学习的简易形式,接着指出在离散动作环境下,行为克隆只关注对齐专家策略采取的动作,忽视其他动作概率信息,对专家信息的提取不够完全。通过类比二次学习,提出能够提取专家数据中更多信息的完全行为克隆方法,并设计了多组对比实验,说明完全行为克隆不仅能缓解行为克隆的复合误差,还具备设备可迁移性高、抗噪能力强、专家数据依赖少等优点。实验结果表明,行为克隆仅需少量改进即可极具实用性,并且保持运行简便。此外,结果也进一步验证了二次学习在强化学习问题中的指导作用和有效性。

关键词： 衰老   大脑皮质   尿液   蛋白质组学  

摘要： 目的检测自然衰老小鼠大脑皮质和尿液的蛋白质组变化,并探索尿液蛋白质组与大脑皮质蛋白质组的关联。方法取1、6和18月龄小鼠各6只,收集尿液并分离生理条件下的大脑皮质。采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术进行蛋白质组分析,进行差异筛选和功能分析,研究尿液和大脑皮质蛋白质组的关联。结果在小鼠大脑皮质鉴定到13021个蛋白质,在小鼠尿液鉴定到1064个蛋白质。1月龄小鼠蛋白质组集中于生长、发育相关通路,6月龄小鼠蛋白质组集中于能量代谢等通路,18月龄小鼠蛋白质组表现出代谢异常和稳态失衡等特征。关联分析发现,尿液能够反映大脑皮质免疫、细胞增殖与衰老相关蛋白质的变化。结论衰老小鼠尿液蛋白质组可以反映大脑皮质变化,为衰老疾病标志物研究提供线索。

关键词： 原发性高血压   微RNAs   内皮,血管  

摘要： 目的分析血清微小RNA(microRNA,miR)-126、miR-18b和miR-29b水平与原发性高血压患者血管内皮功能的相关性。方法选取2022年6月至2025年1月青岛市中医医院心血管二科收治的原发性高血压患者206例(高血压组),根据高血压分级分为1级组89例,2级组70例,3级组47例,又根据是否存在血管内皮功能障碍分为内皮障碍组110例和内皮正常组96例。另选取同期健康体检者103例(对照组)。比较各组血清miR-126、miR-18b和miR-29b表达水平以及内皮依赖性血管舒张功能(flow mediated dilation,FMD)、反应性充血指数(reactive hyperemia index,RHI)、血清内皮素1水平。结果高血压组miR-126、FMD、RHI明显低于对照组,miR-18b、miR-29b、内皮素1水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。2级组和3级组miR-126、FMD、RHI明显低于1级组,miR-18b、miR-29b、内皮素1水平明显高于1级组,差异有统计学意义(P<0.05)。内皮障碍组血清miR-126表达明显低于内皮正常组,miR-18b、miR-29b表达明显高于内皮正常组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血清miR-126与收缩压、舒张压、内皮素1呈负相关,与FMD、RHI呈正相关(P<0.01);血清miR-18b和miR-29b与收缩压、舒张压、内皮素1呈正相关,与FMD、RHI呈负相关(P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,血清miR-18b、miR-29b及高血压分级是高血压患者内皮功能障碍的危险因素,血清miR-126是高血压患者内皮功能障碍的保护因素(P<0.05,P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清miR-126、miR-18b和miR-29b预测高血压患者内皮功能障碍的曲线下面积分别为0.724、0.703、0.742,敏感性分别为0.727、0.646、0.764,特异性分别为0.698、0.688、0.635。结论血清miR-126、miR-18b和miR-29b表达与原发性高血压患者血管内皮功能密切相关,可作为高血压患者内皮功能障碍的预测因素。

关键词： 0x09冬小麦   TaIPT9A   基因克隆   抗寒  

摘要： 细胞分裂素(CKs)在植物生长发育和逆境应答中发挥重要的调控作用,异戊烯基转移酶(IPTs)是CKs生物合成的重要限速酶。为了探究小麦IPT编码基因在植物低温胁迫应答中的作用,从强抗寒冬小麦品种东农冬麦1号(Dn1)分蘖节中克隆了TaIPT9A基因(TraesCS7A02G560300),对其进行生物信息学分析、低温下启动子活性分析,并采用农杆菌介导法将其转入水稻冷敏感品种龙粳11中,对创建的含有TaIPT9A的株系的抗寒功能进行初步分析。结果表明,TaIPT9A基因的CDS为1362 bp,编码453个氨基酸;小麦与粗山羊草IPT蛋白亲缘关系最近;TaIPT9A启动子区含有响应低温、光、ABA、MeJA等顺式作用元件,TaIPT9A启动子活性受低温诱导。与野生型相比,过表达TaIPT9A基因水稻的叶片在低温胁迫下更翠绿、生长状态更好;叶片的脯氨酸(Pro)含量、过氧化氢酶(CAT)活性、抗氧化酶相关基因(OsCATC、OsSOD1、OsSOD2和OsAPX1)及抗寒相关基因(OsCATC、OsDREB1A)的表达量显著提高。这说明TaIPT9A基因增强了水稻幼苗的抗寒性。

关键词： 肉类掺假   双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术   核酸杂交侧流层析试纸条   可视化检测  

摘要： 目的:建立一种基于双拖尾重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合核酸杂交侧流层析试纸条(nucleic acid hybridization-lateral flow strip,NAH-LFS)的多重可视化检测技术,用于同步鉴别驴肉及其制品中鸡、猪、马源性成分,满足快速检测、操作简便及低成本的需求。方法:首先制备不同掺假比例的样品并进行DNA提取。利用primer5软件设计针对鸡、猪、马线粒体细胞色素b(cytb)基因的特异性引物,引物包含3个功能区,即引物序列、spacer9间隔区和单链DNA标签序列(作为拖尾序列),spacer9可以阻止DNA聚合酶的作用使单链DNA标签序列在RPA扩增后仍保持单链状态。随后,制备胶体金纳米粒子并与识别探针偶联、构建核酸杂交侧流层析试纸条、优化RPA反应条件及试纸条的最佳工作条件,并对其检测灵敏度和特异性进行系统验证。最后,应用所建立的方法对40份市售驴肉样品进行检测。结果:RPA最佳反应温度为39℃,孵育时间是10 min,Mg2+(280 mmol/L)添加量为2.5μL,鸡、猪、马引物(10μmol/L)的加入量分别为0.7、0.7、1μL。试纸条采用流速为33.75 cm/s型号的硝酸纤维素膜、流动缓冲液RB4(0.01 mol/L PBS pH8.0、0.05%吐温-20)时显色效果最佳。RPA-NAH-LFS可同时呈现T_(1)(鸡源)、T_(2)(猪源)、T_(3)(马源)3条特征性检测线,总检测时间控制在15 min以内(含10 min扩增及5 min检测反应),对目标肉类的检测灵敏度达0.01%(w/w),对牛、羊等9种常见肉类无交叉反应。用RPA-NAH-LFS对40份市售驴肉样品检测结果显示,1份驴肉包子中检出猪肉和鸡肉成分,1份火锅驴肉卷中检出猪肉成分,检测结果与标准检测(DB42/T 1591-2020)结果完全一致。结论:RPA-NAH-LFS技术通过双拖尾引物设计与多重探针杂交策略,实现了肉类掺假成分的同步可视化检测。该方法兼具高灵敏度、强特异性和操作便捷性,特别适用于基层监管部门和现场快速筛查需求,为肉制品真实性鉴别提供了高效技术手段。

关键词： 四君子汤   多糖   葡聚糖硫酸钠   结肠病变  

摘要： 目的探讨四君子汤防治葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠结肠病变的作用。方法①采用水煎法制备四君子汤水提物,醇沉法和Sevag法提取四君子汤多糖;高效液相凝胶色谱法、气相色谱-质谱联用法分析多糖纯度、相对分子量及单糖组成。②将小鼠分为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(美沙拉秦组,0.1 g·kg^(-1))和四君子汤水提物5、15 g·kg^(-1)组,以及四君子汤多糖0.18、0.53 g·kg^(-1)组;除正常对照组外,其他小鼠连续7 d自由饮用3%DSS溶液建立模型(同时灌胃给药);第4天检测疾病活动指数(DAI)评分;第8天检测结肠长度、质量及单位结肠质量指数、结肠损伤大体及病理评分,免疫组化法检测结肠目标蛋白表达。结果①四君子汤多糖为杂多糖,相对分子量为4881 Da;单糖组成为葡萄糖(79.06%)、半乳糖(9.49%)、阿拉伯糖(7.37%)及少量其他单糖;②四君子汤水提物及其多糖能降低造模小鼠DAI评分及结肠黏膜损伤大体和病理评分,改善结肠长度缩短及重量增加的情况,对造模所致结肠HuR、E-cadherin、Rac1和Cdc42蛋白表达降低有改善作用。结论四君子汤水提物及其多糖对DSS所致小鼠结肠病变有干预作用,其作用机制可能与上调结肠黏膜HuR、E-cadherin、Rac1和Cdc42蛋白表达有关。

关键词： 脐带间充质干细胞   条件培养基   分泌组   颅脑损伤   神经修复   神经炎症   小型猪   工程化干细胞  

摘要： 背景:颅脑损伤是一种高发病率、高致残率及高致死率的常见创伤性疾病,目前缺乏有效的治疗方法,脐带间充质干细胞通过旁分泌途径为颅脑损伤治疗提供了新的研究方向。目的:探讨脐带间充质干细胞条件培养基对外力打击所致小型猪颅脑损伤的治疗作用。方法:选取12头健康小型猪,随机分为模型组和实验组,每组6只,通过外力打击建立猪颅脑损伤模型,实验组造模后以微量注射泵将脐带间充质干细胞条件培养基注入脑损伤处周围4个点进行治疗。术后第1-14天,评价小型猪空间记忆能力;术后第5天,核磁共振扫描评价小型猪脑组织损伤、水肿情况;术后第14天,剖检小型猪脑组织损伤部位,进行苏木精-伊红染色,胶质纤维酸性蛋白、Iba1免疫组化染色和TUNEL染色,评价小型猪脑组织的损伤和修复情况。结果与结论:①实验组小型猪空间记忆能力评分与模型组相比无统计学差异(P>0.05);②术后第5天,两组小型猪脑部均出现明显的脑组织水肿信号,与模型组比较,实验组小型猪脑组织水肿范围缩小;③术后第14天,模型组小型猪损伤部位脑组织可见水肿、淤血、坏死,苏木精-伊红染色可见脑组织坏死,实验组小型猪损伤部位脑组织水肿较模型组减轻;④两组小型猪损伤部位脑组织均可见胶质纤维酸性蛋白和Iba1阳性表达,实验组胶质纤维酸性蛋白和Iba1阳性表达量均低于模型组;⑤TUNEL染色显示两组小型猪损伤部位脑组织均有细胞凋亡阳性表达,实验组凋亡细胞表达量低于模型组。结果表明,脐带间充质干细胞条件培养基通过减少脑组织水肿、降低脑组织炎症、减轻细胞凋亡,对小型猪颅脑损伤发挥治疗作用。