课程文献中心 更多>>

关键词： 84K’杨   R2R3-MYB转录因子   PagRAX2＿16G   表达模式   功能分析  

摘要： 【目的】R2R3-MYB转录因子在植物的生长发育过程中具有广泛的调节作用，探究‘84K’杨（Populus alba×*** 84K） R2R3-MYB成员PagRAX2＿16G的生理功能，为揭示‘84K’杨树次生木质部形成的分子机制提供科学理论依据。【方法】以‘84K’杨为试材，采用同源克隆方法获得PagRAX2＿16G及其启动子，并进行序列分析；使用RT-qPCR和基因特异启动子驱动GUS报告基因的检测方法分析PagRAX2＿16G的表达模式；构建pBI121-35S::PagRAX2＿16G过表达载体、转化‘84K’杨，经PCR和GUS检测获得过表达PagRAX2＿16G阳性植株；以‘84K’杨野生型为对照，测量并统计PagRAX2＿16G过表达植株的株高、茎粗、根长、根粗等外部形态特征，并使用石蜡切片技术观察茎和根的内部组织结构。【结果】PagRAX2＿16G编码区全长999 bp，编码332个氨基酸；PagRAX2＿16G启动子序列长度为1 648 bp，含转录起始核心元件TATA-box等启动子基本元件。RT-qPCR结果表明，PagRAX2＿16G在次生茎、老根、成熟叶中的表达水平显著高于其在初生茎、幼根、幼叶中的表达水平，且在老根中表达量最高。GUS染色结果表明，PagRAX2＿16G主要在器官的维管组织中表达；在具有次生生长的茎和根中，PagRAX2＿16G在形成层及其邻近衍生的维管细胞中表达。经表型分析，与‘84K’杨野生型相比，PagRAX2＿16G过表达株系的株高、茎粗、根长、根粗均显著增加，且茎和根中的次生木质部宽度与层数、形成层层数、导管和纤维细胞面积均显著增加。【结论】PagRAX2＿16G正向调节‘84K’杨形成层向次生木质部的分化和木质部细胞的扩张，在根、茎次生木质部形成过程中发挥重要的调节作用。

关键词： 白术多糖   断奶羔羊   生长性能   抗氧化   免疫   微生物菌群  

摘要： [目的]本试验旨在研究饮水中添加白术多糖(AMP)对断奶湖羊羔羊生长性能、血清指标和粪便微生物的影响。[方法]48只2月龄健康断奶湖羊公羔(17.78±0.58 kg)分为4组,第1组对照组(Con)正常饮水,第2、3、4组在日常饮水添加不同浓度(0.02%、0.05%、0.08%)的白术多糖(AMP2、AMP5、AMP8)。预饲期7 d,正试期40 d,测定各组湖羊生产性能和血清生化、抗氧化和免疫指标,选择对照组以及AMP2组和AMP5组进行粪便微生物测序分析。[结果]结果表明:(1)与对照组相比,21~40 d和1~40 d期间AMP2组平均日增重(ADG)显著增加(P<0.05);21~40 d期间的AMP2组和AMP5组以及1~40 d期间的AMP2组料重比(F/G)显著降低(P<0.05);1~20 d和1~40 d期间各多糖组饮水量均极显著降低(P<0.01),21~40 d期间AMP2和AMP5组(P<0.05)以及AMP8组(P<0.01)饮水量显著或极显著降低;(2)与对照组相比,AMP2组(P<0.05)和AMP5组(P<0.01)血清白蛋白(ALB)含量显著或极显著上升,葡萄糖(GLU)含量极显著上升(P<0.01),各多糖组总胆固醇(T-CHO)含量均显著升高(P<0.05);(3)与对照组相比,各多糖组血清总抗氧化能力(T-AOC)含量均极显著上升(P<0.01),AMP2组和AMP5组超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著上升(P<0.01),AMP2(P<0.05)、AMP5组(P<0.01)和AMP8(P<0.05)过氧化氢酶(CAT)活性显著或极显著上升;(4)与对照组相比,AMP5和AMP8组血清免疫球蛋白(Ig)A 含量显著上升(P<0.05);AMP5组(P<0.01)和AMP8组(P<0.05)IgM含量显著或极显著上升;(5)粪便微生物测序共获得了3993个OUTs;AMP5组微生物Alpha多样性中Observed_species、Chao1和ACE指数显著高于Con组(P<0.05);各组Beta多样性无显著差异(P>0.05);门水平下,AMP2和AMP5组的厚壁菌门(Firmicutes)(P<0.05)和AMP5组的纤维杆菌门(Fibrobacterota)丰度显著高于Con组(P<0.05);属水平下,AMP5组的拟杆菌属(Bacteroides)(P<0.05)和AMP2组的克里斯滕森菌科R-7群(Christensenellaceae_R-7_group)(P<0.05)丰度显著高于Con组。[结论]综上,饮水中添加AMP可改善湖羊血清生化、抗氧化和免疫指标,提高粪便有益微生物的丰度,促进断奶羔羊的生长。

关键词： 红花   CtFDs基因   基因克隆   生物信息学   表达分析  

摘要： 目的 从红花Carthamus tinctorius基因组中克隆CtFD1与CtFD2基因,对其进行生物信息学、表达特异性和亚细胞定位分析。方法 基于红花基因组筛选并克隆CtFD1与CtFD2基因,利用生物信息学在线网站进行理化性质、保守结构域等分析;通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测其组织表达特性;利用烟草瞬时表达系统检测观察亚细胞定位情况;通过优化诱导剂浓度及温度使蛋白为可溶性表达。结果 CtFD1与CtFD2基因CDS大小分别为726 bp和540 bp,编码241和179个氨基酸。二者均包含典型的bZIP转录因子结合域,为亲水性蛋白,定位于细胞核。系统进化树显示与黄花蒿(Artemisia annua)亲缘关系较近。组织表达分析表明,CtFD1与CtFD2基因在茎尖分生组织(shoot apical meristem,SAM)中表达量最高。原核表达分析结果显示在16 ℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L时,蛋白可在上清中大量表达。结论 CtFD1与CtFD2基因属于bZIP家族成员,在红花茎尖分生组织中表达量最高,表明这两个基因对红花开花调控可能发挥重要作用,为进一步研究基因功能及开花机制解析提供了科学依据。

关键词： 烟叶   生物酶   游离氨基酸   感官品质  

摘要： 为探究生物酶处理对浓度(ND)、烟气(YQ)、清香(XQQ)和浓香(XQN)4类功能模块烟叶游离氨基酸特性及感官品质的差异化调控效应,以4类模块配方烟叶为对象,基于制丝生产线实际,喷洒不同配比的复合酶制剂,于50 ℃反应6 h后测定游离氨基酸含量,并结合描述性统计、热图聚类及感官评价进行分析。结果表明,脯氨酸为各模块中占比最高的游离氨基酸(49.38%~65.42%),经优化酶组ND203和YQ204处理后,其含量显著提升,使烟叶甜香增强;从酸碱性分类来看,碱性氨基酸变异系数最高(28.96%~42.34%),说明其对酶处理最为敏感;酸性氨基酸在清香模块优化组XQQ201处理下含量提升47.48%,有效强化了烟叶的酸香清新感。经4类模块对应优化酶组(ND203、YQ204、XQQ201、XQN203)处理后,各模块烟叶杂气均减少20%以上,烤烟烟香、烘焙香和甜香均显著提升;其中,烟气、清香和浓香模块的清滋香有所减弱,浓香模块的焦香则明显增强。综上,通过多酶协同作用,可定向调控模块烟叶游离氨基酸组成,进而实现模块烟叶功能特性的提升,为卷烟工业制丝环节生物酶技术的规模化应用提供了技术支撑。

关键词： 南五味子   联苯环辛烯类木脂素   O-甲基转移酶   功能鉴定   定点突变  

摘要： 联苯环辛烯类木脂素是中药南五味子的主要活性成分,具有保肝、抗炎、抗氧化等多种生物活性,其在植物体内的生物合成是由前戈米辛(pregomisin)经多种酶催化而形成,其中涉及多步O-甲基化过程,主要由O-甲基转移酶(OMT)催化。该研究从华中五味子Schisandra sphenanthera中克隆得到1条SspOMT13甲基转移酶基因,其开放阅读框包含 1 053 bp,编码一个由350个氨基酸组成的蛋白质;对SspOMT13进行生物信息学分析发现,该蛋白具有甲基转移酶特征性结构域,属于I型甲基转移酶;构建其原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导蛋白表达并进行分离纯化,对目标蛋白进行体外酶促实验,结果表明,SspOMT13具有双重催化活性,既能催化戈米辛J(gomisin J)生成戈米辛K1(gomisin K1),又能进一步催化戈米辛K1(gomisin K1)生成五味子甲素(schisandrin A);进一步通过分子对接和定点突变实验得到影响其活性的关键氨基酸位点Pro27、Leu30、Val110、Met113、Trp299。该研究拓展了对木脂素次生代谢关键酶基因的了解,为南五味子品质形成机制的阐明提供了重要的研究基础。

关键词： 菠萝蜜多糖   结构特征   体外活性   肠道微生物  

摘要： 为阐明脉冲-超声协同提取所得菠萝蜜多糖（PUAE-JP）的结构特性、生物活性及其对肠道菌群的调节作用，本研究采用该技术提取并纯化菠萝蜜多糖，通过傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、X射线衍射（XRD）、扫描电镜（SEM）及纳米粒度分析表征其结构，并借助体外抗氧化、糖代谢酶抑制及粪便发酵模型评估其活性与益生功能。结果表明，PUAE-JP是一种以葡萄糖和半乳糖醛酸为主要组分的无定形酸性杂多糖，具有疏松多孔的形貌与较强的表面负电性。体外活性显示，在1–10 mg/mL浓度范围内，PUAE-JP表现出显著的剂量依赖性抗氧化活性(对DPPH、ABTS和羟基自由基的IC50分别为3.23、3.08和3.70 mg/mL)及α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制能力(IC50分别为4.63 mg/mL和3.07 mg/mL)，其抑制机制属于以非竞争性为主的混合型抑制。体外发酵实验进一步表明，PUAE-JP可调节肠道菌群结构，富集巨单胞菌属（Megamonas）和巨球菌属（Megasphaera）等有益菌，抑制梭杆菌属（Fusobacterium）等潜在致病菌，并促进短链脂肪酸的生成及碳水化合物代谢等相关功能通路的表达上调。综上，PUAE-JP兼具良好的降糖活性与益生潜能，是一种具有开发前景的功能性食品成分。

关键词： 弓形虫   内质网应激相关蛋白   免疫球蛋白重链结合蛋白   真核翻译起始因子2α   多克隆抗体  

摘要： 目的 制备刚地弓形虫免疫球蛋白重链结合蛋白(TgBip)和真核翻译起始因子2α(TgeIF2α)多克隆抗体,并评价其特异性。方法 利用生物信息学方法设计TgBip和TgeIF2α基因的特异性引物,以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增目的基因,采用无缝克隆技术,构建pColdⅢ-His-TgBip和pColdⅢ-HisTgeIF2α重组质粒,转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况,采用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白。以纯化后的TgBip和TgeIF2α蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性抗TgBip和TgeIF2α多克隆抗体。通过增强化学发光法(ECL)分析多抗对内源性TgBip和TgeIF2α蛋白的识别情况,间接免疫荧光实验(IFA)检测TgBip蛋白在内质网应激过程中的变化,Western blotting检测内质网应激过程中TgeIF2α磷酸化水平的变化。结果 PCR结果显示,TgBip、TgeIF2α基因特异性扩增片段大小分别为1 920、1 044 bp,与预期片段大小相符。pColdⅢ-His-TgBip和pColdⅢ-His-TgeIF2α重组质粒构建成功。SDS-PAGE和Western Blotting结果表明,TgBip和TgeIF2α蛋白在BL21感受态细胞中高效表达,相对分子质量(Mr)约71 000和40 000,与理论值接近。Western blotting结果表明,制备的抗体可特异性识别弓形虫内源性TgBip和TgeIF2α蛋白,与宿主细胞蛋白无交叉反应。IFA结果表明,TgBip分布于弓形虫内质网,在诱导内质网应激前,TgBip分布在虫体细胞核周围,在内质网应激后,TgBip分布弥散;Western blotting结果表明,诱导内质网应激后磷酸化TgeIF2α相对表达水平为2.199±0.376,高于诱导前的1.217±0.099(t=4.379,P<0.05)。结论 制备的特异性抗TgBip和TgeIF2α多克隆抗体可用于检测弓形虫内质网结构与应激水平。

关键词： 琐琐葡萄   多糖   脱色   抗氧化   响应面法  

摘要： 琐琐葡萄为新疆特色葡萄品种，其果实具有药用价值，具有潜在的抗氧化能力和抗阿尔茨海默病的功效。琐琐葡萄多糖是其重要的有效成分，但制备工艺尚不完善。前期制备的脱蛋白琐琐葡萄多糖含有较多色素，干扰了其多糖的活性评价，同时为了保障后续工艺放大的稳定性和可重复性，研究选择NKA-9、AB-8和D101等6种大孔树脂对其进行了脱色处理，筛选出NKA-9进行响应面法优化脱色工艺，制备了精制脱色琐琐葡萄多糖，并基于体外抗氧化活性检测评估其抗氧化能力。响应面试验结果表明，优化后回归模型极显著，R2值为0.960 4，试验变量对响应值的影响力大小依次为脱色温度 > 脱色时间 > 大孔树脂添加量，其中，脱色温度对脱色综合评分影响极显著，脱色温度和大孔树脂添加量的交互作用、脱色时间和大孔树脂添加量的交互作用、脱色温度和脱色时间的交互作用对脱色综合评分无显著影响。获得10 mg/mL脱蛋白琐琐葡萄多糖最佳脱色参数为：脱色时间178 min，温度85 ℃，大孔树脂添加量0.25 g/mL。在此条件下，脱色综合评分为94.3。试验浓度下，精制脱色琐琐葡萄多糖的最大羟自由基清除率和最大DPPH自由基清除率分别为93.30% ± 1.38%和82.45% ± 1.49%，因此，精制脱色琐琐葡萄多糖是一种天然抗氧化剂。

关键词： 文冠果籽粕多糖   结构表征   响应面优化   抗氧化活性   α-葡萄糖苷酶   α-淀粉酶  

摘要： 为了高值化利用文冠果籽粕,从中提取并纯化多糖(XSP)、表征其基本结构并评价体外抗氧化与抑酶活性。采用单因素与响应面优化提取工艺,纯化得到XSP,测定总糖和糖醛酸含量。利用傅里叶变换红外光谱和核磁共振波谱解析糖苷键,采用刚果红实验、圆二色光谱与X-射线衍射分析表征结构,利用热重分析(TGA)评价热稳定性,通过DPPH·和·OH以及ABTS+·清除实验、α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶酶活抑制实验评价其生物活性。结果表明,最佳提取参数为:料液比1:20(g·mL-1)、80℃、3 h,此时得率为1.59%。XSP的分子量为1.14×10~7 Da,总糖和糖醛酸的质量分数分别为91.07%和10.77%。XSP含α/β糖苷键,单糖以阿拉伯糖、半乳糖为主。TGA表明XSP在200℃以下有良好的热稳定性。XSP具有三股螺旋构象和半结晶特征。此外XSP表现出剂量依赖性的抗氧化和抑酶活性。综上,XSP结构稳定且具有良好的抗氧化与抑酶活性,本研究为文冠果籽粕多糖的结构与活性关系研究及其在功能食品开发中的应用提供理论依据。

关键词： 猫疱疹病毒   gB蛋白   单克隆抗体   抗原表位鉴定  

摘要： 本研究旨在制备并系统评估针对猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)gB蛋白的单克隆抗体。以FHV-1 WX株全病毒为免疫原,经腹腔注射免疫BALB/c小鼠并获得腹水,通过间接ELISA筛选获得对目标抗原具有特异性反应的小鼠。经细胞融合及亚克隆筛选,成功获得特异性结合的单克隆抗体2H2D12G11。经生物学鉴定,该抗体同种型为IgG1,轻链类型为κ。通过Western blot(WB)和间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)实验,结果一致表明该单克隆抗体能够特异性识别不同FHV-1毒株。通过将gB蛋白分段表达,最终确定该单抗识别的抗原表位位于gB蛋白第91–116位氨基酸区间(序列:91VGGTPPKPTTDPTDMSDMREALRASQI116)。运用AlphaFold Server对gB蛋白进行结构模拟显示,该抗原表位位于gB蛋白的N端结构域的前段区域,该区域在三聚体结构中相对外露,跨毒株保守性高,因而具有良好的免疫原性和诊断价值。序列比对显示,该抗原表位在所有FHV-1中均高度保守,但与同属的其他疱疹病毒成员无交叉反应意义。本研究成功制备获得1株特异性单克隆抗体并鉴定出其识别的抗原表位。