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关键词： 蚯蚓蛋白   枯草芽孢杆菌   假单胞菌   松鼠葡萄球菌   复合微生物   氨基酸水溶肥   洋葱  

摘要： 【背景】蚯蚓蛋白是制备优质含氨基酸水溶肥料的理想原料，但其水解菌株资源匮乏、配套微生物发酵工艺研究薄弱严重限制了其产业化应用。氨基酸水溶肥与微生物制剂配施协同增效作用明显，但通过复合微生物发酵水解蚯蚓蛋白，从而直接获取对作物效应优良的复合微生物氨基酸水溶肥的研究尚属空白。【目的】从多株优良防病促生菌中筛选能水解蚯蚓蛋白的菌株，创制复合微生物氨基酸水溶肥并明确其效应。【方法】本研究以发酵液中游离氨基酸含量为指标，采用茚三酮比色法测定各菌株发酵蚯蚓蛋白产游离氨基酸含量，选取水解能力强的菌株，进行亲和性测定后构建复合微生物菌系，并明确不同菌株配比复合菌系水解蚯蚓蛋白的能力，筛选得到最优复合菌系，进一步通过正交试验优化得到最优复合菌系的发酵液最佳配比及发酵条件，最后通过室内盆栽实验明确其对洋葱生长、土壤养分与微生物群落结构的效应。【结果】筛选得到枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）F14、假单胞菌（Pseudomonas sp.）MLB36、松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）LAB2为强水解蚯蚓蛋白菌株，水解产游离氨基酸含量最高为95.9 μg/mL，且之间亲和性良好。菌株F14:MLB36:LAB2配比为2:3:2时水解蚯蚓蛋白能力最强，发酵产游离氨基酸含量为106.34 μg/mL。发酵液最优配比为100 g/L蚯蚓蛋白、0.1 g/L碱性蛋白酶、0.1 g/L酸性蛋白酶，发酵产游离氨基酸含量增至108.84 μg/mL。优化得到其最优发酵条件为：pH 5、接种量8%、转速220r/min、温度36℃、发酵时间48 h，发酵产游离氨基酸含量可达118.69 μg/mL。室内盆栽试验发现，此复合微生物氨基酸水溶肥能使洋葱株高、茎粗、根长、鳞茎直径显著（P<0.05）增加；根际土壤速效氮、速效磷、速效钾含量显著（P<0.05）提升，其中速效氮含量增幅达36.8 mg/kg；土壤细菌、放线菌数量显著（P<0.05）增加，土壤真菌数量显著（P<0.05）降低。【结论】筛选得到3株优良水解蚯蚓蛋白菌株，构建得到复合微生物菌系，创制了1种复合微生物氨基酸水溶肥，具有促进洋葱生长、增加其根际土壤养分、改善其根际土壤微生物群落结构，改良其生长与根际土壤生态因子间协同关系等效能。

关键词： 辣椒   环核苷酸门控离子通道(CNGCs)   生物信息学分析   表达模式   亚细胞定位  

摘要： 环核苷酸门控离子通道(cyclic nucleotide gated ion channels, CNGCs)在植物的信号传导、生长发育、环境胁迫响应等多种生理过程中发挥着极为重要的作用。本研究克隆了辣椒(Capsicum annuum)CaCNGC4基因，并进行CaCNGC4的生物信息学分析、表达模式分析和亚细胞定位分析。结果显示，CaCNGC4的CDS序列长度为2 091 bp，编码696个氨基酸；该蛋白是碱性、不稳定亲水性蛋白，有6个跨膜结构域，无信号肽；亚细胞定位结果表明其定位于质膜。CaCNGC4与马铃薯(Solanum tuberosum)和欧白英(S. dulcamara)的同源性最高，分别为86.64%和85.94%，与番薯(Ipomoea batatas)的同源性最低，为70.07%。利用qPCR方法探究辣椒发育过程中激素处理(脱落酸,赤霉素,茉莉酸甲酯)和非生物胁迫(高温,低温,盐胁迫)下CaCNGC4基因的表达量变化。结果表明，激素处理和盐胁迫处理下，CaCNGC4基因的表达量呈先下降后上升再下降的趋势；高温处理1、1.5和3 h时CaCNGC4表达显著下调(P<0.05),6、12和24 h表达显著上调(P<0.05)；低温处理后CaCNGC4表达显著下调(P<0.05),24 h时与对照无显著差异。该基因启动子区域含有一系列与光反应、激素、外部环境和生长发育相关的顺式元件。本研究可为辣椒生长发育的调控与品种改良工作的开展提供相应理论支撑。

关键词： 济生肾气汤   骨髓间充质干细胞   肝硬化   Th17细胞   Treg细胞  

摘要： 目的：探究济生肾气汤联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植调节Th17/Treg细胞比例失衡改善炎症治疗肝硬化的疗效和作用机制。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、生理盐水组、单纯干细胞组、单纯中药组、低剂量中药联合干细胞组、中剂量中药联合干细胞组、高剂量中药联合干细胞组，每组10只。除正常组外，其余组大鼠腹腔注射40% CCl4橄榄油溶液进行肝硬化造模，每周2次，持续8周。正常组大鼠正常喂养。造模成功后处死正常组与模型组大鼠。生理盐水组、单纯中药组（32.3g/kg）、低剂量中药联合干细胞组（16.15g/kg）、中剂量中药联合干细胞组（32.3g/kg）、高剂量中药联合干细胞组（64.6g/kg）大鼠分别灌喂等体积的生理盐水与各组对应剂量的济生肾气汤，每天1次，持续4周。单纯干细胞组与3个联合组分别在第8、15天进行BMSCs移植。干预结束后，HE染色和天狼星红染色观察肝组织病理形态，血清生化测定肝功能指标（ALT、AST、ALB、TBIL）、凝血功能指标（PT、PTA、INR）， ELISA法检测外周血中抑炎因子（IL-4、IL-10、TGF-β1）、促炎因子（IL-17A、TNF-α）水平，Western blot法检测以上细胞因子在肝组织内的蛋白表达，流式细胞术测定外周血及肝脏中Th17细胞和Treg细胞。结果：与正常组相比，模型组肝组织炎症浸润、“假小叶”形成，血清中ALT、AST、TBIL、PT、INR升高，ALB、PTA下降，ELISA检测和WB检测的IL-4、IL-10、TGF-β1降低，IL-17A、TNF-α升高，外周血及肝脏中Th17细胞升高，Treg细胞降低，两者比值升高。与模型组比较，单纯干细胞组、单纯中药组、低剂量中药联合干细胞组、中剂量中药联合干细胞组、高剂量中药联合干细胞组均可见组织炎症浸润和纤维化程度得到改善，联合组较单纯干细胞组、单纯中药组改善明显，其中以中剂量中药联合干细胞组与高剂量中药联合干细胞组疗效最显著，两组大鼠血液中ALT、AST、TBIL、PT、INR、IL-17A、TNF-α水平降低，ALB、PTA、IL-10含量上升，肝组织中IL-4、IL-10、TGF-β1含量增加，IL-17A、TNF-α含量减少，外周血及肝脏中Th17细胞数量减少，Treg细胞数量增加，Th17/Treg细胞比例下降。结论：济生肾气汤联合BMSCs移植治疗肝硬化有显著疗效，其作用机制可能与调节Th17/Treg细胞比例失衡，进而调节炎症因子与抑炎因子表达相关。

关键词： 多糖   制备工艺   分析方法  

摘要： 本文以河南产决明子为原料，针对决明子多糖传统制备工艺提取率低、分析方法准确性不足的问题，优化苯酚-硫酸法含量测定、高效凝胶渗透色谱。结果表明：决明子多糖最优制备工艺参数为提取温度85℃、提取时间2.5 h、液料比22∶1(mL·g-1)。本研究优化的制备工艺高效稳定，分析方法准确可靠，为决明子多糖的产业化开发及质量控制提供关键技术支撑。

关键词： 豹纹鳃棘鲈   MyoG基因   基因克隆   生物信息学   表达分析  

摘要： 豹纹鳃棘鲈（Plectropomus leopardus）作为深受消费者喜爱的水产品，其肌肉发育水平决定了产肉率和肉质品质。为探究豹纹鳃棘鲈胚后发育不同时期肌细胞生成素（myogenin, MyoG）基因在肌肉组织中的表达规律，本研究通过PCR技术扩增其MyoG基因的CDS区，使用生物信息学软件对其序列和编码蛋白进行分析，并利用qPCR技术研究其在出膜后0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55和60 d共13个时间点的表达情况。结果显示，MyoG基因CDS区全长753 bp，编码250个氨基酸，蛋白分子量为27 345.56D，理论等电点（pI）为6.82，分子式为C1172H1853N342O384S15；不稳定指数为72.06，为不稳定蛋白；脂肪族指数为57.76，总平均疏水性（GRAVY）为-0.644，属亲水蛋白。MyoG蛋白未见信号肽和跨膜区，为非分泌型蛋白质。将其与其他10个物种的MyoG蛋白的氨基酸序列进行同源性分析，发现其与荫平鲉（Sebastes umbrosus）、鞍斑杜父鲈䲢（Cottoperca gobio）等硬骨鱼亲缘关系较近，而与人（Homo sapiens）、非洲爪蟾（Xenopus laevis）等哺乳动物和两栖动物亲缘关系较远。q PCR结果显示，以出膜0 d为对照组，豹纹鳃棘鲈的MyoG基因在仔鱼时期（0～20 d）各时期的表达量均显著上升（P<0.05）；进入稚鱼期后（20～35 d），在25 d时MyoG基因的表达再次出现极显著上升（P<0.001）,30 d时表达量仍维持在较高水平（P<0.05），随后在幼鱼期（35 d后） MyoG基因的相对表达量持续下降，并在45和55 d再次出现上升趋势，其中55 d上升显著（P<0.05）。综上，MyoG基因在进化过程中具有一定的保守性，其在豹纹鳃棘鲈胚后肌肉发育过程中发挥一定作用，在仔鱼期和稚鱼期前期表达量相对较高且差异显著，进入幼鱼期后，相对表达量逐渐降低，提示该基因主要在豹纹鳃棘鲈胚后发育的仔鱼期和稚鱼期的肌肉组织中发挥作用，本研究揭示了MyoG基因在胚后发育早期的表达规律，丰富了该物种肌肉发育相关研究的基础研究数据。

关键词： 气体信号分子   硫化氢   过硫化修饰   蛋白质   植物  

摘要： 硫化氢（H2S）作为一种重要的气体信号分子,在植物生长发育、胁迫应答过程中扮演重要角色,广泛参与植物种子萌发、根系形态建成、花期调控、光合作用及气孔运动等生理过程. H2S行使生理功能的核心机制是通过介导蛋白质半胱氨酸残基发生过硫化（-S-SH）修饰,进而改变靶蛋白的稳定性、亚细胞定位与构象变化等,最终实现对靶蛋白功能的调节.目前植物中已鉴定的-S-SH修饰靶蛋白涵盖酶类蛋白、转录因子、离子通道蛋白等多种类型.最新研究表明,前体mRNA剪接因子也是一类重要的新型-S-SH修饰靶标蛋白,可直接调控基因可变剪接模式.近年来,蛋白质-S-SH修饰检测技术日臻完善,组学层面的修饰位点鉴定技术也取得重要进展.然而,高通量、高特异性的-S-SH修饰靶蛋白及修饰位点的快速、低成本鉴定手段,以及动态监测方法等仍是本领域的技术瓶颈; H2S内源生成的上游调控方式、分子水平的信号转导机制等科学问题,仍有待深入解析.本文综述了植物中H2S介导的蛋白质-S-SH修饰靶标及其生理功能的研究进展,并对该领域未来的研究方向进行展望.

关键词： 槟榔多糖   超声提取   正交试验   抗炎活性   抗氧化   肠道屏障功能  

摘要： 【目的】旨在优化槟榔多糖（Areca catechu L. polysaccharides,ACP）的绿色提取工艺，并系统评价其在安全质量浓度下的体外抗炎、抗氧化及肠道屏障保护活性，为槟榔非食用途径的高值化利用及畜禽健康养殖等领域提供科学依据。【方法】采用超声辅助水提醇沉法，结合酶法与Sevage法除蛋白，以槟榔多糖提取率为指标，通过三因素三水平正交试验优化超声时间、频率及温度参数。利用CCK-8法检测槟榔多糖对RAW264.7巨噬细胞及LS174T肠上皮细胞的毒性，确定安全质量浓度范围。在此基础上，构建LPS诱导巨噬细胞炎症模型，采用qPCR技术检测促炎因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）及抗炎因子（IL-10）的mRNA表达量；探究槟榔多糖对巨噬细胞Nrf2/ARE信号通路关键基因（Nrf2、HO-1、NQO1、SOD1等）、肠上皮细胞紧密连接蛋白编码基因（Claudin1、Occludin、ZO-1）和保护肽编码基因（TFF3、Relm-β）mRNA表达的调控作用。【结果】（1）正交试验确定，最佳提取工艺为超声时间30 min、频率59 kHz、温度70℃，此条件下槟榔多糖提取率达1.52%;(2)细胞毒性试验确定，槟榔多糖的安全作用质量浓度为50～200μg/mL;(3)抗炎结果表明，与对照组相比，槟榔多糖显著抑制IL-1β和IL-6的mRNA表达，并呈剂量依赖性，200μg/mL槟榔多糖显著抑制TNF-α的mRNA表达，并对IL-10呈双向调节作用；（4）抗氧化结果表明，与对照组相比，槟榔多糖对Nrf2/ARE通路具有选择性调控作用，50μg/mL槟榔多糖上调NQO1和SOD1的mRNA表达，100μg/mL槟榔多糖显著上调GCLM和SOD1的mRNA表达，200μg/mL槟榔多糖显著上调NQO1的mRNA表达；（5）肠道屏障结果表明，与对照组相比，槟榔多糖可显著上调LS174T细胞中Claudin1、Occludin和ZO-1的mRNA表达，并促进保护肽TFF3和Relm-β的mRNA表达，但对MUC2和SPRR2α的mRNA表达无明显影响。【结论】优化后的超声提取工艺稳定可行，槟榔多糖提取率达1.52%。在安全质量浓度（50～200μg/mL）下，槟榔多糖兼具抗炎、抗氧化及增强肠道机械屏障与化学屏障的多重功效，具备开发为新型绿色饲料添加剂或肠道健康功能因子的潜力。

摘要： 增强型冷冻电镜揭示新药物靶点并提升细胞内部成像清晰度通过快速冷冻蛋白质并以电子束轰击，冷冻电子显微镜（cryoEM）彻底改变了结构生物学，揭示了数千种无法结晶且难以通过传统X射线分析解析的蛋白质结构。如今，一项激光驱动的技术升级有望进一步拓展该技术的应用范围，使其中最小、最难观测的靶点清晰可见。美国加州大学伯克利分校研究者报道了一种增强对比度的冷冻电镜系统，该系统利用强激光束使微小蛋白质从周围背景噪声中凸显出来。英国罗莎琳德·富兰克林研究所结构生物学家Michael Grange（未参与该研究）表示：“目前，我们只能看到感兴趣目标的一小部分。”该研究于2026年6月11日在线发表于《Science》。他指出，借助激光，“我们可以看得更清晰”。

关键词： 山药多糖   家禽   免疫系统  

摘要： 为应对家禽养殖中抗生素滥用引发的残留与耐药性问题，绿色免疫增强剂的研发成为行业迫切需求。山药多糖作为天然植物提取物，具备免疫调节、抗炎、抗氧化等多重活性，在替抗养殖中具有广阔的应用前景。本文系统综述了山药多糖对家禽免疫功能的调控作用及其机制。结果表明，山药多糖可显著促进胸腺、脾脏及法氏囊等免疫器官发育，提高免疫器官指数；能有效诱导脾脏淋巴细胞及外周血淋巴细胞的增殖；同时上调免疫细胞因子、免疫球蛋白及溶菌酶等免疫因子的表达水平，增强肠道黏膜屏障功能。此外，山药多糖可提升疫苗免疫后的抗体效价，延长抗体高峰持续时间，并具有抗病毒活性。未来应聚焦低成本产业化提取、构效关系解析、改性复配及不同养殖场景下的精准应用方案，以推动山药多糖作为高效、安全的替抗免疫增强剂在家禽绿色养殖中的实际应用。

关键词： 醛固酮增多症   转录组   蛋白质组   脂肪酸合酶   细胞增殖   脂肪酸代谢  

摘要： 目的 基于转录组与蛋白质组联合分析筛选肾上腺醛固酮瘤（APA）的核心致病基因并验证其生物学功能。方法 收集APA组织及肾上腺无功能腺瘤对照组织各3例，同步进行全转录组测序（RNA-seq）与定量蛋白质组学检测。基于转录组与蛋白质组的联合分析，筛选差异表达基因与差异表达蛋白，并通过功能富集分析识别核心通路及关键分子。进一步通过体外细胞实验，采用过表达与沉默技术调控脂肪酸合酶（FASN）表达，检测细胞增殖率、腺苷三磷酸（ATP）含量及醛固酮合成酶（CYP11B2）蛋白的表达。结果 共鉴定到10 705个可定量转录本与3 288个可定量蛋白，其中907个分子为两组学共同覆盖。差异分析显示，APA中转录与蛋白水平同步上调的分子共167个，协同下调的分子共213个。功能富集分析表明，协同上调分子显著富集于脂肪酸生物合成、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）信号通路及胆固醇代谢等脂代谢相关通路，其中脂肪酸生物合成通路富集显著性最高。进一步筛选出10个核心通路共同富集的关键分子，其中FASN作为脂肪酸合成的限速酶，在APA中信使核糖核酸（mRNA）与蛋白水平均显著上调。过表达FASN显著促进细胞增殖（P<0.001），降低ATP生成量（P<0.001），并上调CYP11B2蛋白表达（P<0.001）；而沉默FASN则呈现相反结果（P<0.01）。结论 FASN作为脂肪酸合成通路的关键限速酶，可促进肿瘤细胞增殖及醛固酮合成关键酶表达，可能参与APA的发病进程。