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关键词： 高原低氧   脐带间充质干细胞   睾丸   超微结构   活性氧   线粒体   精子活力   示踪  

摘要： 背景:高原低氧环境可损伤男性生殖系统,干细胞是否能够保护高原低氧环境引起的雄性生殖系统损伤仍未见报道。目的:探讨人脐带间充质干细胞移植对低氧雄性小鼠生殖损伤的预防效应。方法:分离培养人脐带间充质干细胞并进行三系分化及流式鉴定。21只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、低氧组和干细胞组(n=7)。低氧组和干细胞组构建模拟海拔5 000 m大气含氧量(体积分数11.1%氧气)的小鼠慢性间歇低氧模型。干细胞组小鼠在低氧暴露每周的最后1 d,尾静脉注射1×10~6人脐带间充质干细胞,每周1次,共注射6次,其余组注射PBS。实验期间监测小鼠体质量、摄食量和饮水量。低氧暴露结束后,对睾丸组织进行形态学、超微结构、活性氧水平、线粒体膜电位分析;对附睾组织进行苏木精-伊红染色及精子活力分析;通过DIL荧光示踪法观察干细胞的归巢能力。结果与结论:(1)人脐带间充质干细胞移植显著改善了低氧小鼠的饮水和摄食量,但对体质量无明显影响;(2)形态学分析显示,低氧引起小鼠睾丸和附睾水肿,生精细胞脱落,而人脐带间充质干细胞移植缓解了低氧造成的组织结构损伤,并逆转了生殖细胞线粒体肿胀和萎缩;同时,人脐带间充质干细胞移植显著抑制了低氧诱发的活性氧增高,恢复低氧小鼠的线粒体膜电位,并提高低氧小鼠的精子活力;(3)示踪实验显示:人脐带间充质干细胞进入小鼠体内后,主要聚集在肺组织,而在睾丸的归巢能力较低。总之,人脐带间充质干细胞移植可通过保护生殖细胞线粒体结构及功能,减轻低氧造成的睾丸及附睾水肿,从而恢复小鼠生精功能及精子活力。

关键词： 干细胞治疗   牙周膜干细胞   胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)   细胞增殖   成骨分化   细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)  

摘要： 背景:胶原三螺旋重复蛋白1是骨形成的正向调节因子,但是其在牙周膜干细胞中的作用及机制尚未明确。目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1对人牙周膜干细胞增殖、成骨分化的影响及作用机制。方法:体外分离培养人牙周膜干细胞,用过表达胶原三螺旋重复蛋白1慢病毒载体转染细胞,通过CCK-8法和流式细胞术检测过表达胶原三螺旋重复蛋白1对牙周膜干细胞增殖活性的影响;通过碱性磷酸酶活性、茜素红染色检测过表达胶原三螺旋重复蛋白1对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响;采用Western blot检测过表达胶原三螺旋重复蛋白1后细胞外调节蛋白激酶1/2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2蛋白表达;采用Western blot和qRT-PCR检测阻断细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路后,过表达胶原三螺旋重复蛋白1对牙周膜干细胞成骨分化相关因子Runt相关转录因子2、骨钙素、Osterix表达的影响。结果与结论:(1)CCK-8和流式细胞术结果显示,过表达胶原三螺旋重复蛋白1能够促进牙周膜干细胞增殖;(2)碱性磷酸酶活性、茜素红染色显示,过表达胶原三螺旋重复蛋白1能够促进牙周膜干细胞的成骨分化;(3)Western blot结果显示,过表达胶原三螺旋重复蛋白1激活了细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路;(4)Western blot和qRT-PCR结果显示,过表达胶原三螺旋重复蛋白1促进了Runt相关转录因子2、骨钙素、Osterix蛋白和mRNA的表达,当使用细胞外调节蛋白激酶信号通路特异性抑制剂PD98059抑制信号通路激活后,成骨相关因子表达上调出现了一定程度的抑制。以上结果提示:过表达胶原三螺旋重复蛋白1可以促进牙周膜干细胞的增殖和成骨分化,其促成骨分化作用可能与细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的激活有关。

关键词： 人脐血间充质干细胞   膝骨关节病   软骨损伤   Meta分析   目测类比评分   西安大略和麦克马斯特大学膝骨关节病指数   膝关节功能评分   不良反应  

摘要： 目的:采用Meta分析人脐血间充质干细胞对膝骨关节病患者疼痛和功能的影响。方法:以“人脐血,间充质干细胞,膝骨关节病”为中文检索词,以“human cord blood,mesenchymal stem cell,MSC,knee osteoarthritis,knee joint disease,knee joint disorders,knee OA”为英文检索词,检索中国知网、万方、维普、PubMed、Elsevier、Web of Science数据库,检索时限从各数据库建库至2024-06-13。纳入文献质量评价使用Corchrane偏倚风险评估工具和ROBINS-I工具,Meta分析选择Revman软件,对于连续性变量计算均数差,对于二分类变量计算相对危险度,另计算95%置信区间。结果:纳入随机对照试验3篇,病例-对照研究3篇,合计248例研究对象,文献质量评价中等。Meta分析结果显示:(1)试验组患者目测类比评分低于对照组,差异有显著性意义(χ^(2)=44.98,P <0.001,I2=91%);(2)试验组患者西安大略和麦克马斯特大学膝骨关节病指数低于对照组,差异有显著性意义(χ^(2)=16.84,P <0.001,I2=88%);(3)试验组患者Lysholm膝关节功能评分高于对照组,差异有显著性意义(χ^(2)=0.12,P=0.73,I2=0%);(4)试验组患者不良反应发生率高于对照组,差异有显著性意义(χ^(2)=4.99,P<0.001,I2=20%),合并风险差为0.21,折算成所需治疗人数为5。结论:人脐血间充质干细胞可以减轻膝骨关节病患者的疼痛,改善膝关节功能,并在安全性与有效性之间实现了良好的平衡。

关键词： 肺纤维化   细胞外囊泡   细胞调控网络   生长因子   上皮间质转化  

摘要： 背景:肺纤维化是一种以细胞外基质异常沉积为特征的慢性进行性肺疾病,目前缺乏有效的治疗手段。间充质干细胞来源细胞外囊泡凭借脂质包膜结构可穿越体内屏障,将多种抗纤维化、免疫调节因子(如生长因子、免疫调节细胞因子、趋化因子)、脂质和核酸(mRNA和miRNA)等生物活性物质直接递送至肺内靶细胞。目的:系统综述间充质干细胞来源细胞外囊泡治疗肺纤维化的核心机制,总结和阐述间充质干细胞来源细胞外囊泡将携带的生物活性物质直接递送至肺内不同靶细胞,展现出调控肺纤维化微环境的独特优势,为将来利用间充质干细胞来源细胞外囊泡治疗肺纤维化疾病提供理论基础。方法:应用计算机检索中国知网、Pub Med数据库、***数据库和中国临床试验注册中心,英文检索关键词为“Mesenchymal stem cells,Extracellular vesicles,Pulmonary fibrosis,Alveolar epithelium,Microvascular endothelium,Macrophages,Neutrophils”,中文检索关键词为“间充质干细胞,细胞外囊泡,肺纤维化,上皮细胞,血管内皮细胞,巨噬细胞,中性粒细胞”,最终纳入56篇文献进行总结。结果与结论:在肺泡上皮细胞中,通过调控蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β、转化生长因子β/Smad等信号通路抑制上皮间质转化进程,以及特定miRNA(如miR-466f-3p、let-7等)阻断促纤维化通路网络。而在成纤维细胞和内皮细胞中,分别通过miR-21-5p和miR-218/miR-214-3p干预成纤维细胞的活化和内皮间质转化,同时从宏观上重编程单核细胞、调控巨噬细胞极化、抑制树突细胞成熟及平衡Th17/Treg反应,重塑免疫微环境。此外,基于工程化修饰(靶向肽修饰、药物共载)的间充质干细胞来源细胞外囊泡还可增强病变区域多细胞亚型的精准靶向性,而囊泡异质性、规模化制备标准及体内动态示踪技术仍是临床转化的关键瓶颈。未来研究需结合单细胞测序与空间多组学技术,深入解析间充质干细胞来源细胞外囊泡干预细胞调控网络的深入机制,制定以细胞为靶点的新型肺纤维化临床治疗策略。

关键词： 异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)   非原发病浸润中枢神经系统疾病(NPI-CNS)   移植物抗宿主病(GVHD)   血栓性微血管病(TMA)   钙调磷酸酶抑制剂相关脑病   中枢神经系统感染   可逆性后部脑病综合征(PRES)   中枢神经系统白血病(CNSL)  

摘要： 背景:异基因造血干细胞移植后可合并非原发病浸润相关中枢神经系统疾病的并发症,其临床症状、可能的发病原因及预后目前尚未有明确的定论。目的:探讨异基因造血干细胞移植后非原发病浸润中枢神经系统疾病的临床特征、危险因素及预后,以期为临床早期诊断、病因干预及预后改善提供循证依据。方法:回顾性分析2015年1月至2024年6月期间298例血液病患者在异基因造血干细胞移植后发生非原发病浸润中枢神经系统疾病的临床资料、实验室特征及治疗过程,分为非原发病浸润中枢神经系统疾病组(n=19)和对照组(未发生非原发病浸润中枢神经系统疾病,n=279),通过统计学方法对发病原因进行危险因素分析,对发病患者的临床症状、可能的发病原因及预后进行评估。结果与结论:(1)298例接受异基因造血干细胞移植患者中,有19例发生非原发病浸润中枢神经系统疾病,发病率为6.4%;(2)发病的中位时间为移植后16 d(2-45 d),患者主要以抽搐作为首发症状,同时伴随血压升高、头痛、视力下降、意识障碍及精神行为异常等表现;(3)单因素分析显示,粒系植入时间、血小板植入时间、移植前中枢神经系统白血病病史以及III-IV度移植物抗宿主病的发生与非原发病浸润中枢神经系统疾病的发病存在显著关联,具体病因分析结果显示:钙调磷酸酶抑制剂相关脑病2例,中枢神经系统损伤4例,中枢神经系统感染4例,移植相关血栓性微血管病4例,中枢神经系统移植物抗宿主病1例,颅内出血2例,内分泌代谢相关脑病1例,病因不明1例;(4)截至随访日期,19例异基因造血干细胞移植后出现非原发病浸润中枢神经系统疾病患者的累计死亡率为47%(9/19),显著高于对照组的累计死亡率28.6%(80/279);进一步分析显示,非原发病浸润中枢神经系统疾病组患者移植后1年和2年的预计总生存率均显著低于对照组。总之,异基因造血干细胞移植后非原发病浸润中枢神经系统疾病由多种移植相关因素共同引发,及时识别致病因素并进行精准的诊断与治疗,对改善移植相关非原发病浸润中枢神经系统并发症患者的预后至关重要。

关键词： 槲皮素   颌骨   骨髓间充质干细胞   细胞增殖   细胞衰老   细胞迁移   成骨分化   蛋白激酶B   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白  

摘要： 背景:增龄性退变与骨代谢失衡密切相关,在颌骨表现为牙槽骨吸收、牙齿松动甚至脱落,衰老颌骨骨髓间充质干细胞成骨向分化潜能受损是颌骨再生修复障碍的重要原因。槲皮素作为天然黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎及调控细胞分化的潜力,但槲皮素对衰老颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化的影响与机制尚不明确。目的:探究槲皮素对衰老颌骨骨髓间充质干细胞增殖、迁移、成骨分化以及衰老的影响。方法:分离10只8周龄SD大鼠下颌骨,采用骨髓冲洗和骨片消化相结合的方法培养颌骨骨髓间充质干细胞。颌骨骨髓间充质干细胞传代培养至第3代和第7代分别作为年轻细胞组和衰老细胞组,槲皮素组在衰老细胞组的基础用槲皮素干预。采用CCK-8法检测0.01,0.1,1,10,100μmol/L槲皮素溶液对衰老颌骨骨髓间充质干细胞增殖的影响,筛选出最适槲皮素浓度。细胞划痕实验观察细胞迁移能力;RT-qPCR、Western blot检测衰老标志物的表达;β-半乳糖苷酶染色观察阳性细胞比例。成骨诱导7 d,RT-qPCR、Western blot检测成骨相关标志物表达;成骨诱导14 d行碱性磷酸酶染色;成骨诱导21 d行茜素红染色。Western blot检测磷酸化蛋白激酶B、蛋白激酶B、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达。结果与结论:(1)与年轻细胞组相比,衰老细胞组增殖能力下降;与衰老细胞组相比,1μmol/L槲皮素促衰老颌骨骨髓间充质干细胞增殖效果显著(P<0.01);(2)与衰老细胞组相比,槲皮素组衰老颌骨骨髓间充质干细胞的迁移能力提高,β-半乳糖苷酶阳性细胞比例显著降低,衰老相关P16、P53、P21 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);(3)成骨诱导后,与衰老细胞组相比,槲皮素组钙结节形成能力、碱性磷酸酶染色面积以及碱性磷酸酶、骨桥蛋白和Runt相关转录因子2 mRNA、蛋白表达升高(P<0.05);(4)与衰老细胞组相比,槲皮素组蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05)。这些结果表明槲皮素可通过调控蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制多次传代引起的颌骨骨髓间充质干细胞衰老并促进成骨分化。

关键词： 人脐带间充质干细胞   脑白质损伤   少突胶质细胞   髓鞘   新生大鼠  

摘要： 背景:髓鞘化障碍是早产儿脑白质损伤的核心特征。近年来,人脐带间充质干细胞用于多种脑损伤动物模型研究中,显示具有修复髓鞘的能力。阐明人脐带间充质干细胞促进神经髓鞘化的调控机制,将有助于优化治疗策略并推动临床应用转化。目的:探讨人脐带间充质干细胞对脑白质损伤新生大鼠少突胶质细胞谱系成熟停滞所致髓鞘化障碍的修复作用。方法:选取72只2日龄Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组、脑白质损伤组和人脐带间充质干细胞移植组,每组24只。采用小剂量脂多糖联合缺氧缺血建立新生大鼠脑白质损伤模型。造模后第14天,通过苏木精-伊红染色观察脑白质病理改变,结合免疫组织化学染色、蛋白免疫印迹实验和实时荧光定量聚合酶链式反应联合检测少突胶质细胞系转录因子2、神经胶质抗原2、髓鞘碱性蛋白阳性表达、蛋白及mRNA表达水平。造模后第28天,通过劳克坚牢蓝染色观察神经髓鞘形成情况,通过莫里斯水迷宫实验测试大鼠空间学习记忆能力。结果与结论:(1)造模后第14天,苏木精-伊红染色结果显示:脑白质损伤组大量细胞变性坏死及神经纤维排列紊乱;人脐带间充质干细胞移植组细胞形态接近正常,神经纤维排列较为整齐;(2)造模后第14天,各组间少突胶质细胞系转录因子2阳性表达、蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P> 0.05);与假手术组相比,脑白质损伤组神经胶质抗原2阳性表达、蛋白及mRNA表达水平上调(P <0.05),而髓鞘碱性蛋白阳性表达、蛋白及mRNA表达水平下调(P <0.05);与脑白质损伤组相比,人脐带间充质干细胞移植组神经胶质抗原2阳性表达、蛋白及mRNA表达水平下调(P <0.05),而髓鞘碱性蛋白阳性表达、蛋白及mRNA表达水平上调(P <0.05);(3)造模后第28天,劳克坚牢蓝染色结果显示:与假手术组相比,脑白质损伤组神经髓鞘表达减少(P <0.05);与脑白质损伤组相比,人脐带间充质干细胞移植组神经髓鞘表达增加(P <0.05);(4)造模后第28天,莫里斯水迷宫结果显示:与假手术组相比,脑白质损伤组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);与脑白质损伤组相比,人脐带间充质干细胞移植组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增加(P<0.05);各组间平均游泳距离无统计学差异(P> 0.05)。结果表明,人脐带间充质干细胞可促进脑白质损伤新生大鼠少突胶质细胞谱系发育成熟,修复髓鞘化障碍并改善认知功能。

关键词： 间充质干细胞   衍生物   肝纤维化   肝星状细胞   铁死亡   机制  

摘要： 背景:多种慢性肝病迁延不愈均会进入肝纤维化阶段,如未及时得到治疗则最终会进展为肝癌,严重影响患者的生命安全。但目前尚无治疗肝纤维化的特效药,最新研究表明间充质干细胞疗法较传统治疗方案具有显著优势,为肝纤维化治疗提供了新方向。目的:综述间充质干细胞及其衍生物治疗肝纤维化的作用机制。方法:以“间充质干细胞,间充质基质细胞,肝纤维化,肝细胞死亡,肝细胞样细胞,免疫调节,巨噬细胞,肝星状细胞,临床试验,临床研究”和“mesenchymal stem cells,mesenchymal stromal cells,MSCs,liver fibrosis,hepatic fibrosis,hepatocyte death,liver cell death,hepatocyte-like cells,immunomodulation,macrophage,hepatic stellate cells,clinical trials,clinical studies”分别作为中、英文关键词,在中国知网、PubMed数据库进行检索,最终纳入符合标准的81篇文献进行综述。结果与结论:通过对现有的研究进行总结,归纳间充质干细胞及其衍生物能够发挥抗纤维化作用并延缓疾病进展的作用机制,具体机制包括减少肝细胞死亡、分化为肝细胞样细胞、调控免疫反应、抑制肝星状细胞活化等,证实间充质干细胞及其衍生物可作为肝纤维化相关疾病治疗研究的新方向。

关键词： 衰老   骨髓间充质干细胞   多发性骨髓瘤   半乳糖凝集素3   旁分泌   骨髓微环境   凋亡   增殖  

摘要： 背景:研究发现,多发性骨髓瘤微环境具有诱导间充质干细胞成衰老表型的功能,而衰老骨髓间充质干细胞对多发性骨髓瘤细胞影响的研究鲜有报道。目的:探讨衰老骨髓间充质干细胞通过旁分泌半乳糖凝集素3对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响。方法:取健康供者骨髓血,通过Ficoll密度梯度离心法和贴壁纯化法提取骨髓间充质干细胞。取第3代骨髓间充质干细胞,采用200μmol/L过氧化氢溶液诱导2 h,再用L-DMEM完全培养基培养24 h,构建衰老骨髓间充质干细胞模型,通过β-半乳糖苷酶染色及衰老基因P21表达进行鉴定,RT-qPCR检测衰老骨髓间充质干细胞中半乳糖凝集素3的表达。收集衰老骨髓间充质干细胞上清液并通过离心浓缩制备衰老骨髓间充质干细胞条件培养基,用其培养多发性骨髓瘤细胞株U266 24 h,CCK-8检测U266细胞增殖情况,流式细胞仪检测U266细胞凋亡情况,RT-qPCR及Western blot检测U266细胞中BCL-2蛋白及mRNA表达。收集多发性骨髓瘤患者和健康人的骨髓,通过ELISA方法检测半乳糖凝集素3水平。结果与结论:(1)过氧化氢诱导后,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多,P21和半乳糖凝集素3 mRNA表达上调(P<0.01);(2)与对照组相比,衰老骨髓间充质干细胞条件培养基培养U266细胞24 h后,细胞增殖水平升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),BCL-2蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.05);(3)多发性骨髓瘤患者骨髓半乳糖凝集素3水平较健康人明显增加(P<0.05)。结果表明:衰老骨髓间充质干细胞可能通过旁分泌半乳糖凝集素3,上调BCL-2表达水平,促进多发性骨髓瘤细胞的增殖。

关键词： 前列腺癌   前列腺周围脂肪组织   脂肪干细胞   细胞外基质   细胞膜片  

摘要： 背景:前列腺周围脂肪组织是最接近前列腺的白色内脏脂肪组织,属于前列腺癌肿瘤微环境的一部分,在前列腺癌发生和进展中起关键作用。目的:观察前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞形成三维细胞膜片的能力。方法:选取拟行前列腺癌根治术患者,术中切取前列腺周围脂肪组织,采用酶消化联合机械切割方式制成脂肪干细胞悬液,CCK-8试剂盒检测脂肪干细胞增殖情况,流式细胞仪检测干细胞相关抗原CD34/CD44/CD45/CD90/CD105表达,采用成骨/成脂/成软骨诱导分化试剂盒检测干细胞多向分化潜能。将前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞用含100μg/mL维生素C、体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液连续培养3周构建细胞膜片,进行组织学分析和扫描电镜观察。结果与结论:(1)前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞呈长纺锤体或长梭形,同向生长,形态较为一致;原代培养9-10 d可达到95%细胞融合,细胞活性良好,连续传代到第15代时仍未见明显细胞衰老迹象;(2)流式细胞检测CD44、CD90和CD105表达率为98.24%,84.99%和89.14%;CD34和CD45表达率为0.64%,1.02%;经成骨/成脂/成软骨诱导3周后,前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞能多向分化诱导为成骨细胞、成脂肪细胞和成软骨细胞;(3)前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞经连续培养3周即可形成三维细胞膜片组织,表面光整,质地均匀,其中纤连蛋白和I型胶原蛋白等细胞外基质含量丰富;扫描电镜观察结果显示膜片表面平整,长梭形细胞排列方向一致,细胞间大量胞外基质沉积。该实验从前列腺癌患者前列腺周围脂肪组织中原代分离脂肪干细胞,通过维生素C刺激细胞外基质分泌,连续培养3周成功构建细胞三维膜片。