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关键词： CTCF   SALL3/DNMT3A轴   肝癌干细胞   自我更新   免疫逃逸  

摘要： 目的 探讨CCCTC结合因子（CTCF）通过SALL3/DNMT3A轴对肝癌干细胞自我更新和免疫逃逸的影响。方法 将tLyP-1-EV-sh-CTCF转染至肝癌干细胞LCSCs中，为tLyP-1-EV-sh-CTCF-LCSCs组；将WZB117抑制剂与LCSCs共孵育，为WZB117抑制剂-LCSCs组；使用qRT-PCR检测肝癌细胞系HCCLM3细胞与LCSCs细胞中CTCF的mRNA表达水平，以及LCSCs组、tLyP-1-EV-sh-CTCF-LCSCs组和WZB117抑制剂-LCSCs组糖酵解标志物（HK2与PFKM）及细胞干性标志物（FBP1与PCK1）的mRNA的表达水平；使用细胞迁移与细胞克隆实验评价sh-CTCF与糖酵解抑制对LCSCs组、tLyP-1-EV-sh-CTCF-LCSCs组和WZB117抑制剂-LCSCs组细胞干性的影响；使用qRT-PCR检测sh-CTCF敲减对SALL3、DNMT3A表达的影响，以及过表达SALL3对DNMT3A的影响。结果 与对照组（未转染）相比，tLyP-1-EV-sh-CTCF组细胞中CTCF mRNA与蛋白的表达量均较低（均P<0.05）,PFKM与PCK1的mRNA表达降低（均P<0.05）,HK2与FBP1呈下降趋势（均P<0.05）;WZB117抑制剂处理后，与转染sh-CTCF组比较，PFKM与PCK1的mRNA表达降低（均P<0.05）,HK2与FBP1呈下降趋势（均P>0.05）；过表达SALL3可抑制PD-L1表达并促进MHC-Ⅰ表达，抑制LCSCs自我更新并下调免疫逃逸相关分子表型，同时伴随糖酵解相关分子表达下调（均P<0.05）;tLyP-1-EV-sh-CTCF转染可上调SALL3表达、下调DNMT3A表达，并伴随糖酵解相关分子表达下调（均P<0.05）。结论 sh-CTCF调控SALL3/DNMT3A轴与糖酵解相关标记物下调相一致，并伴随肝癌干细胞自我更新及免疫逃逸相关分子表型的减弱。

关键词： 呼吸道合胞病毒   F蛋白   单B细胞抗体技术   抗体筛选技术  

摘要： 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体之一，其融合蛋白(F)是介导病毒入侵的关键靶点，具有预融合(pre-F)和融合后(post-F)两种构象。其中，对中和抗体最为敏感的抗原表位仅存在于pre-F构象上，因而成为当前疫苗和抗体药物开发的焦点，然而pre-F构象处于亚稳态，在膜融合或自发触发后会不可逆地转变为post-F构象，因此，特异性识别post-F的抗体可用于定量检测疫苗中post-F的含量，从而评估疫苗的稳定性及纯度。基于此，本研究建立了涵盖从免疫到抗体筛选全流程的兔源单B细胞抗体平台，并利用该平台成功获得两株对RSV post-F具有高特异性和亲和力的兔单克隆抗体。表位鉴定结果表明，二者均结合于site I之外的区域。初步应用验证了该抗体在疫苗原液检测中的可用性，提示其在抗原构象稳定性与纯度评估方面具备良好的应用潜力。本研究为RSV及其他呼吸道病毒疫苗的研发提供了重要的平台支持与工具抗体。

关键词： 原核Argonaute   寡聚化   激活机制   核酸检测   抗菌核酸药物  

摘要： 原核Argonaute（prokaryotic Argonaute, pAgo）是细菌对抗外来遗传物质的重要免疫防御工具，具有广阔的核酸检测应用前景，同时也展现出成为新型细菌治疗核酸药物的潜力。近期多项结构与功能研究表明，pAgo在识别靶核酸后，往往通过寡聚状态的改变来实现效应功能的激活。本文对相关研究进展进行了系统梳理，总结其内在规律，以期为核酸检测工具的优化及抗菌策略的开发提供理论依据。在短pAgo（short pAgo）系统中，如SPARTA（short prokaryotic Argonaute and TIR-APAZ）、SPARSA（short prokaryotic Argonaute and SIR2-APAZ）与SPARDA（short prokaryotic Argonaute and DNase/RNase-APAZ）,向导RNA介导的靶DNA识别可触发单体或异源二聚体向高阶寡聚体转变。其中，SPARDA可进一步形成纤维结构，并通过DREN核酸酶结构域的四聚化激活旁切核酸酶活性；而SPARSA和SPARTA系统则通过四聚化诱导沉默信息调节因子2（Sir2）和Toll/白细胞介素-1受体（TIR）结构域发生构象重排，从而激活NADase活性并导致细菌体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）氧化型[NAD（P）+]耗竭。相比之下，火球菌（Pyrococcus furiosus）的Argonaute蛋白（PfAgo）等长pAgo（long pAgo）系统虽不形成高阶聚集体，但靶DNA结合仍可诱导稳定的二聚化，从而稳定催化环结构以促进切割活性。总体而言，pAgo的寡聚化不仅构成其免疫防御功能的关键分子基础，也为核酸检测技术的发展提供了重要启示。通过工程化设计以寡聚化为触发机制的信号放大策略，结合化学修饰的高稳定性向导RNA,可触发细菌的程序性死亡，有望开发全新的细菌治疗核酸药物。

关键词： 脓毒症   乳酰化   代谢重编程   表观遗传调控   免疫调节  

摘要： 脓毒症是一种伴随免疫功能紊乱、血管稳态失调和代谢重编程的炎症综合征，乳酸异常积累是其关键特征之一。乳酸介导的蛋白质乳酰化修饰可通过调控免疫细胞活化、炎症因子表达、代谢途径和细胞程序性死亡等参与脓毒症的疾病进程。乳酰化通过影响炎症反应与免疫功能，介导代谢状态重塑，并进一步调控血管内皮功能，在脓毒症进程中发挥重要作用。尽管既往研究提示乳酰化在脓毒症相关炎症反应、代谢紊乱及器官功能损伤中具有重要调控作用，但整体调控框架尚未完全建立，且作为潜在干预靶点的理论基础仍需进一步夯实。本文围绕乳酰化在炎症与免疫、代谢重编程、血管稳态及细胞死亡中的作用机制进行综述，以期为相关机制研究及靶向干预提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas   多重核酸检测   人乳头瘤病毒  

摘要： 目的 基于CRISPR/Cas12a反式切割单/双链核酸的活性差异特点，建立多重核酸检测探针(Multiple CRISPR/Cas12a Reporter, MCR),并用于HPV分型检测。方法 设计不同荧光标记的并与靶核酸互补配对的单链DNA探针，使其能与待测单链靶核酸互补配对形成双链核酸；利用探针-靶核酸所形成的双链能够抵御Cas12a反式切割(单链DNA探针不能)的特性，实现阴/阳性样本的差异性荧光信号输出。采用多重PCR扩增待测样本，利用T7转录将扩增产物转录为大量单链靶RNA,MCR进行靶标识别和信号输出，由“PCR-T7转录-MCR”组成检测系统命名为PTMCR。结果 CRISPR/Cas12a反式切割单链DNA探针的活性明显高于切割“探针-靶核酸”双链的活性，基于此特性的MCR在单一反应管内实现了对HPV16/18两种靶核酸的区分识别。较长的单链靶核酸(100 nt)与MCR探针结合后，能更好地抵抗Cas12a切割；Cas12a切割MCR探针10 min时，其荧光信号最适合用于结果判断。PTMCR的检测灵敏度高、特异性好，能准确区分HPV亚型。PTMCR检测45例临床样本，其HPV分型检测结果与临床常用多重实时荧光PCR的检测结果完全一致(100%)。结论 本研究成功建立了一种新型多重核酸检测探针(MCR)和一套灵敏特异的多重核酸检测系统(PTMCR),为多重核酸检测提供了新方案。

关键词： 病原体   呼吸道感染   儿童   流行特征   深圳   肺炎支原体   人鼻病毒   呼吸道合胞病毒  

摘要： 目的 分析2022-2025年深圳市妇幼保健院儿童呼吸道感染常见9种病原体的流行特征及变化趋势,为儿童呼吸道感染疾病的防控和诊治提供科学依据。方法 收集2022年1月-2025年12月间深圳市妇幼保健院26475例急性呼吸道感染患儿呼吸道核酸检测结果。据不同就诊类型、年龄、季节分析9项常见病原体分布特征。结果 病原体总阳性率58.70%(15542例),检出病原体前三位分别为人鼻病毒(20.40%)、呼吸道合胞病毒(11.64%)和肺炎支原体(7.10%)。混合感染占10.64%(1653/15542),鼻病毒+呼吸合胞病毒组合最常见。门诊患儿病原体阳性率(72.60%)高于住院患儿(56.18%),1～6岁儿童感染高发,肺炎支原体和甲型流感病毒检出率随年龄而增长,呼吸道合胞病毒和副流感病毒多见于婴幼儿组。季节分布上,春季总阳性率最高(62.18%),呼吸道合胞病毒、鼻病毒和腺病毒分别在春、秋、冬季达峰。实施“乙类乙管”政策后,病原体总检出率由27.75%升至59.84%,呼吸道合胞病毒季节分布偏移至夏季。混合感染自3.85%增至10.75%。结论 病原体流行特征受年龄、季节影响显著;政策实施后,儿童呼吸道病原体总感染率显著上升,部分病原体流行规律发生改变,需结合年龄、季节及政策后病原谱变化制定针对性的防控和诊疗策略。

关键词： XMU-MP-1   Hippo信号通路   炎症微环境   骨髓间充质干细胞  

摘要： 目的:通过体外诱导方法创建骨髓源性炎症模型,研究XMU-MP-1通过调控Hippo通路增强骨髓间充质干细胞(BMSC)在炎症微环境下的抗炎作用。方法:采用脂多糖(LPS)诱导建立体外炎症模型,将BMSC随机分为对照组、LPS组及XMU-MP-1干预组。通过检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平评价BMSC炎症反应;采用阿利新蓝染色、茜素红染色及相关成骨、成软骨标志基因表达分析BMSC分化能力;同时检测Hippo通路相关蛋白表达变化,以探讨其可能的作用机制。结果:与对照组相比,LPS刺激使BMSC中IL-6、TNF-α分泌水平分别显著升高13.7倍和7.08倍(均P<0.001),并使成骨分化钙结节数量减少55.31%、成软骨分化软骨基质阳性染色表达水平降低30.67%(均P<0.01),显著抑制其成骨及成软骨分化能力;XMU-MP-1 100nmol/L干预后,BMSC中IL-6、TNF-α表达水平较LPS组分别降低41.24%和63.84%(均P<0.001),80nmol/L干预组则分别降低43.06%和65.7%(均P<0.01);成骨分化钙结节数量在80、100nmol/LXMU-MP-1干预组较LPS组分别提升54.42%、98.01%,成软骨分化软骨基质阳性染色水平则分别提升11.41%、21.14%(均P<0.01),成骨及成软骨相关指标得到显著恢复。机制研究显示,XMU-MP-1可下调Hippo通路上游关键蛋白磷酸化水平,并伴随YAP活性增强。结论:XMU-MP-1可在一定程度上改善炎症微环境下BMSC的抗炎能力及分化功能,其作用可能与Hippo-YAP信号通路调控有关。本研究为进一步探讨炎症状态下骨髓微环境调控机制提供了实验依据。

关键词： 液态CO   水合物   氨基酸   水溶性促进剂   界面控制   CO   封存  

摘要： 纯水体系中液态CO2水合物生成受界面控制，普遍存在界面成核慢、致密水合物膜阻碍持续生长、最终生成量低三大瓶颈，而氨基酸类促进剂在液态CO2体系中的作用规律尚不明确。针对该问题，在恒温276.15K、恒压6.0MPa条件下，以90mL去离子水为基准体系，系统考察了L-半胱氨酸、L-蛋氨酸、L-亮氨酸、L-色氨酸及L-缬氨酸五种水溶性氨基酸在0.1-2.0wt%浓度范围内对液态CO2水合物生成行为的影响。以最终生成量、前60min平均生成速率及达到最终生成量90%所需时间(t90)为评价参数，结合可视化观测对各促进剂进行多维度对比。结果表明：五种氨基酸均呈现显著的浓度依赖性，综合促进效果大小顺序为L-色氨酸>L-缬氨酸>L-蛋氨酸>L-半胱氨酸>>L-亮氨酸>纯水；其中2.0wt%L-色氨酸体系水合物最终生成量达到0.6115mol，较纯水组提高212.5%。机理分析表明，氨基酸促进剂的差异化作用本质上由侧链官能团主导：L-色氨酸依靠芳香疏水侧链强化界面并维持后期持续生长，L-半胱氨酸与L-蛋氨酸通过含硫位点点调节界面微环境，L-亮氨酸与L-缬氨酸则以疏水烷基侧链驱动界面富集为主。研究可为液态CO2水合物高效促进剂设计及CCUS深海封存工艺开发提供实验依据与理论参考。

关键词： 脂质纳米颗粒   mRNA疫苗   mRNA递送   香菇多糖   免疫应答  

摘要： 目的 mRNA疫苗技术迅速发展，但以脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle, LNP)为代表的疫苗递送系统在实际应用中仍面临兼顾高效抗原表达与有效免疫激活的挑战。针对这一问题，本研究构建了一种香菇多糖(lentinan, LNT)修饰的mRNA-LNP疫苗递送系统。方法 通过在LNT分子上引入疏水脂肪链，合成具有两亲性特征的十二酰基化香菇多糖(dodecanoylated lentinan, dLNT)。随后，采用微流控技术将dLNT、LNP脂质组分及编码模型抗原的mRNA共同组装，构建表面修饰dLNT的疫苗体系dLNT/LNP。围绕粒径、Zeta电位、mRNA包封率及多糖负载率等关键参数，对处方工艺进行了系统优化。结果 优化后的dLNT/LNP颗粒形貌均一、分散性良好，粒径处于适宜的递送范围，并保持较高的mRNA包封率。体外实验证实，dLNT修饰可显著增强树突状细胞(dendritic cell, DC)对LNP的摄取，促进抗原蛋白表达，并上调DC成熟标志物CD80和CD86的表达水平，表明该体系能够促进mRNA递送与抗原表达，并增强抗原呈递细胞的活化。进一步体内研究显示，经肌内注射后，负载萤光素酶mRNA的dLNT/LNP在小鼠引流淋巴结中表现出更高的生物发光水平，表明其可增强引流淋巴结中的mRNA递送与抗原表达，从而为后续免疫细胞间的抗原呈递过程提供条件。结论 本研究构建了一种兼具递送增强与免疫调控潜力的mRNA疫苗递送系统，可为新型mRNA疫苗载体的设计与开发提供实验依据。

关键词： 铁皮石斛多糖(DOP)   保健功能   证据分级   知识图谱   多维证据评价  

摘要： 本研究系统检索并筛选出铁皮石斛多糖（Dendrobium officinale polysaccharides，DOP）相关研究文献50篇，结合117款市售铁皮石斛保健食品信息，依据《保健食品原料保健功能声称科学证据评价技术》（T/CNSS 031-2024）构建了DOP的多维证据评价体系，系统性评价了DOP的保健功能相关研究证据；并采用知识图谱法对DOP功能证据、产品信息及其关联关系进行综合分析。在本研究构建的多维证据分级框架下，DOP的免疫调节和肠道菌群调节功能方向具有相对较充分的证据支持；降血糖相关研究仍缺乏人群研究证据；抗炎及抗肿瘤相关研究主要来源于体外和体内实验，属于药理活性探索证据，不宜直接外推为保健食品功能声称；抗氧化等其他功能方向的研究证据相对有限。市场分析显示，免疫调节为当前铁皮石斛保健食品的主流申报方向，而以DOP肠道菌群调节为卖点的产品开发仍存在明显空白，具备较大开发潜力。本研究可为DOP后续功能研究、产品开发及保健功能评价提供参考。