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关键词： 宫腔粘连   子宫内膜损伤   子宫粘连   子宫内膜纤维化   miR-122-5p   脂肪间充质干细胞   外泌体  

摘要： 背景:miRNA作为重要的基因表达调控分子,在组织修复中发挥关键作用,而外泌体是很有前景的药物载体,为递送miRNA进行靶向治疗提供了新的策略。目的:探讨过表达miR-122-5p的脂肪间充质干细胞外泌体对大鼠宫腔粘连的治疗效果。方法:收集宫腔粘连患者和正常无宫腔粘连患者的子宫内膜组织,采用qPCR检测miR-122-5p的表达差异。通过慢病毒载体转染方法将miR-122-5p转染至人脂肪间充质干细胞中,采用3D FloTrix viva Exo外泌体收获系统提取外泌体。将36只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、外泌体组和miR-122-5p转染外泌体组,后3组用刮宫+脂多糖双重损伤法构建宫腔粘连模型,术后第7天,正常组和模型组经尾静脉注射PBS,外泌体组和miR-122-5p转染外泌体组经尾静脉注射天然人脂肪间充质干细胞外泌体和miR-122-5p转染的人脂肪间充质干细胞外泌体。治疗第7天,各组随机取3只大鼠,分离子宫组织进行苏木精-伊红染色、Masson染色和免疫组化检测,每组剩余6只雌鼠按2∶1的比例与雄鼠合笼,合笼2周后观察大鼠胚胎着床位置和数量。结果与结论:(1)miR-122-5p在宫腔粘连患者子宫内膜组织中低表达;(2)通过双重损伤法于术后第7天成功构建了SD大鼠宫腔粘连模型,与正常组相比,miR-122-5p在模型组子宫内膜中表达降低(P<0.01);(3)治疗7 d后,苏木精-伊红染色和Masson染色显示,与正常组相比,模型组大鼠子宫内膜厚度、腺体数量均显著降低,纤维化面积明显增加(P<0.05);与模型组相比,外泌体组和miR-122-5p转染外泌体组均能显著增加子宫内膜厚度、腺体数量并减少纤维化(P<0.05),且miR-122-5p转染外泌体组的治疗效果更加显著;(4)正常组、模型组、外泌体组、miR-122-5p转染外泌体组的妊娠率分别为100%,33.3%,66.7%,83.3%;模型组胚胎数量显著低于正常组(P<0.05),而miR-122-5p转染外泌体组胚胎数量高于模型组(P<0.05)。结果表明,miR-122-5p转染的人脂肪间充质干细胞外泌体通过促进子宫内膜再生、抑制纤维化,有效改善宫腔粘连大鼠的生育能力。

关键词： 鱼糜制品   外源添加物   品质调控   复配协同   蛋白质  

摘要： 外源添加物是提升鱼糜制品综合品质并实现其高值化的关键技术路径。本文系统综述了外源添加物在凝胶增强、风味改良、色泽保护与营养强化四个维度的应用及其作用机制,得出以下核心结论:复配协同是实现功能优化的关键策略;不同类别添加物的作用机制具有特异性,凝胶增强剂可通过物理填充、网络互穿或共价交联等途径发挥作用,而风味与色泽的改善则分别依赖于对呈味/腥味物质的精准调控以及对氧化链式反应的抑制;新型递送系统(如高内相乳液、微胶囊)为营养强化提供了有效方案。当前研究已从宏观性能评价逐步深入到分子互作机制的阐释,但仍面临与“清洁标签”发展趋势相协调、多组分协同机制解析不足等挑战。未来产业发展将聚焦于绿色添加物开发、智能化精准加工与全链条营养安全评价,以期推动鱼糜制品产业实现高质量、可持续发展。

关键词： 间充质干细胞外泌体   低氧预处理   妊娠期糖尿病   胰岛素抵抗   免疫调节  

摘要： 目的 探讨低氧预处理的间充质干细胞外泌体(hMSC-Exos)对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠模型的疗效、机制及安全性,评估其作为GDM新型治疗策略的潜力。方法 人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)于5%O2条件下培养,采用超滤浓缩结合超速离心法分离外泌体。雌性SD大鼠随机分为4组(每组10只):正常对照(Control)组、模型对照(Diabetic)组、外泌体治疗(Exosome)组、胰岛素治疗(Insulin)组。妊娠第0天腹腔注射链脲佐菌素(STZ,1%,pH4.5)建立GDM模型,每日监测体质量、血糖,于妊娠第0天(gestationalday0,GD0),GD5,GD10,GD15检测糖化血红蛋白(HbA1c)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。于GD0及GD15行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),并计算曲线下面积(AUC)。超声评估妊娠大鼠不同时期胎儿发育。妊娠结束时检测血常规,淋巴细胞亚群(Th17、Treg)及妊娠结局。结果 与模型对照组相比,外泌体治疗组自GD15起体质量显著增加(P<0.0001);自GD10起血糖显著降低(P<0.0001),并于GD20接近正常水平。外泌体治疗组HbA1c自GD10显著降低(P<0.0001),GD15时较模型对照组降低22.6%;妊娠末期,外泌体治疗组HOMA-IR显著低于模型对照组(P<0.0001);GD15时OGTT-AUC降低46.65%(P<0.0001);超声显示外泌体治疗组宫内生长受限改善;治疗未引发严重血液毒性或免疫失衡,外泌体治疗组Th17比例显著低于模型对照组(P<0.01),Treg比例显著高于模型对照组(P<0.05),Th17/Treg比值下降3倍;胎儿体质量及数量均显著高于模型对照组(P<0.001)。结论 hMSC-Exos治疗可有效改善GDM大鼠血糖代谢、减轻胰岛素抵抗,并通过调节Th17/Treg免疫平衡改善妊娠环境,促进胎儿发育,安全性良好。

关键词： 黑果枸杞   LrMYB64基因   花青素   腋芽   转录组测序   功能分析  

摘要： 黑果枸杞(Lycium ruthenicum)是我国西北地区特色的药食同源植物,果实富含花青素,具有极高的药用价值。为了解析黑果枸杞花青素合成的关键调控因子,该研究以黑果枸杞为材料,结合前期转录组分析克隆出候选基因LrMYB64,构建过表达载体并通过本源转化获得转基因枸杞,结合转录组测序解析其分子调控网络。结果表明:黑果枸杞中LrMYB64基因过表达,显著抑制花青素合成通路的关键结构基因(LrCHS1B、LrCHS2、LrF3H、LrDFR、LrANS、LrA3GT等)的表达,使植株花青素水平降低约91.75%,显著激活多个激素信号转导相关基因(LrPR4、LrPP2C51、LrSAUR36、LrGH3.6、LrARF5、LrABF4等)的表达,腋芽萌发数量提高至野生型的3倍。综上,该研究初步证实LrMYB64基因通过负向调控花青素合成通路和正向调控激素信号转导通路,形成1个以其为核心的基因调控网络,从而协同调控植物的次生代谢与激素响应过程。

关键词： 超声波   低共熔溶剂   丝兰花   抗氧化   降血糖   多糖  

摘要： 以丝兰花为原料,探究超声波辅助低共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)提取丝兰花多糖,并评价其体外抗氧化和降血糖活性。在单因素试验基础上,利用响应面试验优化丝兰花多糖的提取工艺,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)清除率和2,2-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)清除率为指标,综合评价其体外抗氧化活性,以α-淀粉酶抑制率为指标,评价其体外降血糖活性。丝兰花多糖的最佳提取工艺为液料比70:1 (mL/g)、含水量45%、超声功率180 W,多糖提取量为(44.06±1.02)mg/g,纯化后总糖含量为89.59%。扫描电镜分析表明超声波辅助DES提取能有效破坏丝兰花粉末的细胞壁结构,其呈现破碎粗糙的形貌。丝兰花多糖对DPPH·、ABTS+·的半数清除率IC50值分别为0.45、0.27 mg/mL,并对α-淀粉酶具有抑制作用。超声波辅助DES提取丝兰花多糖,工艺简便可行,为丝兰花资源高值化利用及开发具有抗氧化和代谢调节功能的新型饲料添加剂提供了理论依据。

关键词： 腐败细菌   酸胁迫适应性响应   蛋白组学   平行反应监测   支链氨基酸   核苷酸补救途径   严谨反应  

摘要： 作为酸性果汁中典型的腐败菌,酸土脂环酸芽孢杆菌可导致果汁品质劣变、腐败,造成严重经济损失。我们前期研究发现,酸土脂环酸芽孢杆菌中存在酸胁迫适应性响应(AAR),其可增强菌体对酸和高温的耐受性。但是,关于AAR的潜在调控机制仍不清楚。本研究采用基于串联质谱标签(Tandem mass tag,TMT)标记的定量蛋白组学技术和平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)靶向蛋白组学试验测定了酸土脂环酸芽孢杆菌在酸适应性胁迫过程中的蛋白表达特性,进一步对蛋白组与转录组学进行了联合分析。结果显示,酸适应性胁迫处理后,在酸土脂环酸芽孢杆菌中共鉴定出100个差异表达蛋白,同时,为验证TMT测定结果的准确性,利用PRM技术对其中的15个蛋白进行了靶向定量。基因在转录和翻译水平的表达量间呈弱相关性,仅20个基因在转录和翻译水平均显著差异表达,且在两个水平的表达趋势一致。差异表达蛋白和基因的功能分析显示,酸土脂环酸芽孢杆菌可通过改变脂肪酸组成和上调膜相关脂蛋白TmpC,对其细胞膜结构进行显著修饰。支链氨基酸代谢、谷氨酸脱羧酶系统、脲酶系统和P型ATP酶的表达上调,从而协同维持细胞内pH值的稳定,且该协同反应在转录水平的响应强于蛋白水平。嘧啶的从头与补救合成通路均被激活,而嘌呤合成仅补救途径上调,且这些代谢调控在蛋白质和mRNA水平均发生了显著响应。此外,(p)ppGpp介导的严谨反应被激活。该研究解析了酸土脂环酸芽孢杆菌中AAR的调控机制,可为果汁工业开发有效的控制策略提供潜在靶点。

关键词： 新型口腔修复材料   聚醚醚酮   MAPK/ERK信号通路   牙髓干细胞   细胞增殖   细胞周期  

摘要： 背景:聚醚醚酮作为新型盖髓材料用于活髓保存治疗时,其表面特性与释放的活性成分可协同调控牙髓干细胞增殖,但具体的作用机制尚未明确。目的:探究聚醚醚酮对牙髓干细胞增殖的影响及相关机制。方法:(1)分离培养人牙髓干细胞。采用不同质量浓度[0(对照),0.1,1,10 mg/mL]聚醚醚酮培养人牙髓干细胞48 h,EdU染色与CCK-8法检测细胞增殖,免疫印迹检测细胞外信号调节激酶、磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达。采用1 mg/mL聚醚醚酮培养人牙髓干细胞0,24,48,72,96,120 h,CCK-8法检测细胞增殖。采用0(对照),1 mg/mL聚醚醚酮培养人牙髓干细胞48 h,流式细胞仪检测细胞周期。(2)将人牙髓干细胞分3组培养:对照组不进行任何干预,聚醚醚酮组加入1 mg/mL聚醚醚酮,聚醚醚酮+U0126组加入1 mg/mL聚醚醚酮与10μmol/L细胞外信号调节激酶抑制剂U0126,培养48 h后,EdU染色与CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,免疫印迹检测细胞外信号调节激酶、磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达。结果与结论:(1)1 mg/mL聚醚醚酮组细胞增殖快于其余3组,磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达高于对照组、0.1 mg/mL聚醚醚酮组,因此,后续实验选择1 mg/mL聚醚醚酮进行干预。1 mg/mL聚醚醚酮培养96 h的细胞增殖快于24,48,72 h。1 mg/mL聚醚醚酮组G0/G1期细胞比例低于对照组,S期细胞比例高于对照组。(2)聚醚醚酮组细胞增殖快于对照组、聚醚醚酮+U0126组,G0/G1期细胞比例低于对照组、聚醚醚酮+U0126组,S期细胞比例与磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达高于对照组、聚醚醚酮+U0126组。(3)结果表明,聚醚醚酮通过激活丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶促进牙髓干细胞增殖。

关键词： 天然多糖   水凝胶   组织工程   药物递送   生物医学应用  

摘要： 天然多糖因具有丰富的官能团与良好的生物安全性,为构建可调控三维网络水凝胶并实现多功能生物医学应用提供了重要材料基础。该文综述了天然多糖基水凝胶的构建策略及其在生物医学领域的研究进展,重点梳理了物理交联、化学交联与混合交联等主要制备方法,阐明了不同交联机制对材料性能的调控规律;在此基础上,评述了淀粉、纤维素、海藻酸、壳聚糖、透明质酸、葡聚糖和黄原胶基水凝胶的构建特点、性能优势及其在组织工程、创面修复、药物控释与生物传感等领域的应用现状;总结了该领域当前面临的主要挑战,展望了高性能、智能化天然多糖基水凝胶的设计与生物医学的应用。

关键词： 聚合物膜   纳米孔道   单分子测量   电化学   膜-孔界面   疏水小分子传感  

摘要： 生物纳米孔道单分子电化学测量技术具有无标记、高灵敏和高分辨等优势, 已广泛应用于DNA、RNA、多肽及糖类等生物小分子的检测. 然而, 对于在水相中溶解度较低的疏水分子, 通常需引入有机溶剂以提高其溶解性, 而传统纳米孔道技术所采用的磷脂支撑膜对有机溶剂耐受性有限, 限制了该技术在疏水分子测量及相关研究中的应用. 为此, 本研究利用两亲性嵌段共聚物聚乙二醇-聚甲基丙烯酸苯酯(PEG-b-PPhMA), 构建了一种对有机溶剂具有良好耐受性的仿生双分子层聚合物膜. 通过调控聚合度和溶剂组成, 实现了膜体系的高稳定性和优良的隔绝离子传输性能, 可应用于气单胞菌溶素(Aerolysin)生物蛋白质纳米孔道的单分子测量研究. 结果表明, 在v丙酮/v水=0.3混合缓冲体系中, 该“膜-孔”系统仍可保持长期稳定测量并获得高信噪比离子电流信号, 从而实现了疏水有机小分子的单分子电化学测量. 本研究构建的聚合物膜有效解决了生物纳米孔道在水-有机体系中的稳定性难题, 拓展了纳米孔道技术在药物研发、生命分析、环境监测和单分子反应等研究中对疏水分子的测量潜力.

关键词： 间充质干细胞   再生   组织工程   颅骨   面骨  

摘要： 目的:颅颌面组织再生修复是口腔与再生医学领域的关键挑战。间充质基质/干细胞(mesenchymal stromal/stem cells,MSCs)作为核心效应细胞,其功能受代谢、表观遗传与免疫网络的多维精密调控。本文系统综述了MSCs在颅颌面组织再生中的功能调控机制,重点探讨了力学刺激、代谢重编程、H2S气体信号以及表观遗传修饰对MSCs干性维持、定向分化及免疫调节功能的影响。同时,阐述了MSCs通过外泌体等载体与免疫细胞相互作用,共同调控骨稳态与再生进程的双向机制。文末展望了基于MSCs及其工程化外泌体的靶向治疗策略所面临的挑战与临床转化前景,旨在为颅颌面缺损的再生修复提供新的见解。