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关键词： 小核酸药物   寡核苷酸疗法   心血管疾病   高脂血症   心肌病  

摘要： 目的:为探讨心血管疾病小核酸药物临床研发特点及关键技术考虑。方法:调研国内外药品监管机构监管进展及相关文献,梳理国内外心血管疾病小核酸药物上市及在研药物情况,分析研发特点及关键技术难点,并结合审评实践提出技术建议。结果与结论:① 小核酸药物因精准靶向及沉默特定基因、作用持续时间长及明显降低给药次数等优势,在血脂异常、转甲状腺素蛋白淀粉样变性伴心肌病等需长期治疗的心血管常见病或罕见病中均显示出较大潜力。②基于小核酸药物作用特点,创新研发该类药物应该关注以下方面:小核酸药物组织药效学半衰期较长,存在药代动力学和药效学分离的特征,探索和确证临床试验中给药方案、研究周期等方面应基于其药效学持久性情况进行设计,确保合理的给药间隔、足够长的研究周期,以充分评估其有效性及安全性。

关键词： 紫花苜蓿   MsERD15   表达分析   细胞质定位   酵母   非生物胁迫  

摘要： ERD15(EARLY RESPONSIVE TO DEHYDRATION 15)是植物逆境响应的重要调控因子。本研究克隆紫花苜蓿(Medicago sativa L.)MsERD15基因,并通过生物信息学、表达模式及功能分析探讨其抗逆作用。利用RT-PCR克隆MsERD15基因并分析蛋白理化性质、结构域及系统进化关系;qRT-PCR检测干旱、高盐及脱落酸(Abscisic acid, ABA)处理下的表达模式;构建MsERD15-YFP融合载体进行亚细胞定位;通过酵母异源表达验证抗逆功能。结果表明:MsERD15编码区全长402 bp,编码134个氨基酸;该基因受干旱、高盐及ABA显著诱导;蛋白定位于细胞质。酵母表达MsERD15可显著提高对高盐和聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)胁迫的耐受性。说明MsERD15参与逆境响应,可作为紫花苜蓿抗逆分子育种的候选基因。

关键词： 菜籽粕   快速型黄羽肉鸡   标准回肠氨基酸消化率   预测模型  

摘要： 旨在评估快速型黄羽肉公鸡(湘佳黄鸡)对10种不同来源菜籽粕的标准回肠氨基酸消化率,同时基于菜籽粕的化学成分含量构建标准回肠氨基酸消化率(SIDAA)的预测方程并对其准确性进行验证。选取1日龄湘佳黄鸡1056只,试验分为两个阶段,第一阶段(14~18日龄)于14日龄选取体重无显著差异的肉鸡660只,随机分为11组,每组6个重复,每个重复10只;第二阶段(35~39日龄)于34日龄另外选取体重无显著差异的肉鸡396只,随机分为11组,每组6个重复,每个重复6只。10个处理组分别饲喂以菜籽粕作为唯一蛋白来源的半纯合日粮,另外1个处理组饲喂无氮日粮用于估测内源氨基酸损失,以0.4%二氧化钛作为指示剂,测定快速型黄羽肉公鸡14~18日龄和35~39日龄的标准回肠氨基酸消化率。经检测,不同来源菜籽粕的粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗灰分和植酸含量的变异系数(coefficient of variation,CV)均超过10%。动物试验结果显示:1) 在14~18日龄时,不同来源的10种菜籽粕的SIDAA值仅色氨酸组间差异不显著(P>0.05),其他17种氨基酸的SIDAA值组间差异极显著(P<0.001);在35~39日龄时,不同来源的10种菜籽粕的SIDAA值组间均存在差异,其中色氨酸的SIDAA值组间差异显著(P=0.021),其他17种氨基酸的SIDAA值组间差异极显著(P<0.001)。2) 14~18日龄阶段,本试验构建了快速型黄羽肉公鸡菜籽粕精氨酸、组氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸和脯氨酸的SIDAA预测方程,其中最佳方程为:SIDPro=-240.466+76.8516×Lys+9.0189×ADF-3.7549×NDF+119.1471×Trp-8.8585×CF+25.7707×Asp [R2=0.9953,RSE=1.7079,P=0.0140];35~39日龄阶段:本试验构建了快速型黄羽肉公鸡菜籽粕精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和丝氨酸的SIDAA预测方程,其中最佳方程为SIDSer=-1469.202+153.9385×Lys+32.291×ADF-12.071×NDF+1350.3454×Trp+440.8203×Arg-186.9594×Phe-17.8164×CP[R2=0.9999,RSE=0.0566,P=0.0040]。3) 快速型黄羽肉公鸡14~18日龄菜籽粕准确性最佳的SIDAA预测模型为SIDAla;快速型黄羽肉公鸡35~39日龄菜籽粕准确性最佳的SIDAA预测模型为SIDLys。综上,不同来源、不同日龄快速型黄羽肉公鸡菜籽粕的标准回肠氨基酸消化率(SIDAA)存在差异;本研究中的预测模型对于菜籽粕的肉鸡SIDAA预测有较好的参考价值。

关键词： 椰子油   脂多糖   仔猪   肌肉损伤   cGAS-STING信号通路  

摘要： 本试验旨在研究饲粮中添加椰子油对脂多糖(LPS)诱导的仔猪肌肉损伤和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路的影响。选取28日龄的“杜×长×大”断奶仔猪24头,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复1头猪。采用2×2因子设计,主因子分别为饲粮处理(添加3%大豆油或3%椰子油)和LPS处理(注射LPS或生理盐水)。在试验第28天,仔猪腹腔注射100μg/kg BW的LPS或等量生理盐水,4 h后屠宰取样。结果表明:1)在LPS刺激下椰子油显著降低了血清中总蛋白(TP)含量(P<0.05),并缓解了LPS诱导的血清中葡萄糖(GLU)含量的降低(P>0.05);2)椰子油显著加剧了LPS诱导的肌肉中白细胞介素-6(IL-6)mRNA相对表达量的升高(P<0.05),并显著抑制了LPS诱导的肌肉中白细胞介素-10(IL-10)mRNA相对表达量的升高(P<0.05);3)椰子油显著降低了肌肉中丙二醛(MDA)含量(P<0.05),且显著缓解了LPS诱导的肌肉中总抗氧化能力(T-AOC)的升高(P<0.05);4)椰子油显著提高了肌肉中叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA相对表达量(P<0.05),并在LPS刺激下显著提高了肌肉中FOXO1和叉头框蛋白O4(FOXO4)mRNA相对表达量(P<0.05);5)椰子油显著提高了肌肉中2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)mRNA相对表达量(P<0.05),且显著加剧了LPS诱导的肌肉中STING mRNA相对表达量的升高(P<0.05)。综合以上结果得出,饲粮中采用椰子油代替等量的大豆油会促进cGAS-STING信号通路的激活,加剧LPS诱导的仔猪肌肉炎症反应和蛋白质降解。

关键词： 小麦   抗旱基因   TaDROT-6B1   功能标记  

摘要： 干旱是制约小麦生产的主要环境因素,抗旱品种选育与应用对保障国家粮食安全具有重要意义。为挖掘小麦抗旱基因及其优异单倍型,本研究以10份不同抗旱类别小麦品种为材料,克隆水稻抗旱基因OsDROT1的同源基因Ta DROT-6B1(TraesCS6B02G418400)并开发高通量竞争性等位基因特异性PCR(KASP)功能标记进行效应验证。中国春Ta DROT-6B1基因全长3 340 bp,编码447个氨基酸,包含6个外显子和5个内含子。序列分析发现,该基因在10个品种间共有7个单碱基突变,1个插入突变,分为2种单倍型。单倍型Ⅰ包括洛麦42、洛麦47、中麦30、中麦895、中麦175和洛旱22等不抗旱和中等抗旱品种,单倍型Ⅱ包括洛旱2号、洛旱7号、洛旱28和晋麦47等强抗旱品种。第三外显子起始密码子下游1 362 bp处单倍型Ⅱ插入TCC碱基,编码丝氨酸。第一外显子起始密码子下游64 bp单倍型Ⅰ序列为G,单倍型Ⅱ序列为A,导致编码氨基酸由丙氨酸突变成苏氨酸;针对该变异位点开发了KASP功能,并在自然群体进行了产量相关性状验证。正常处理条件下,单倍型Ⅱ和单倍型Ⅰ品种的平均千粒重分别比干旱处理显著提高17.1%和13.2%,平均株高分别比干旱处理显著提高8.0%和16.0%。本研究克隆小麦抗旱基因Ta DROT-6B1并开发了功能标记,为小麦抗旱品种改良提供了重要的基因资源和分子标记。

关键词： 桑黄多糖   提取工艺优化   粒子群算法优化-反向传播神经网络(PSO-BPNN)   抗肺癌活性   网络药理学  

摘要： 为优化桑黄多糖提取工艺并评价其抗肺癌活性,采用热水回流法提取多糖,结合单因素与正交试验确定关键参数,构建粒子群优化-反向传播神经网络(particle swarm optimization - back propagation neural network,PSO-BPNN)模型进行工艺优化。通过网络药理学、分子对接及MTT实验探讨其抗肺癌机制。结果表明:最佳提取条件为提取温度83 ℃、提取时间1.8 h、料液比1:20(g/mL),多糖得率为6.78%;网络药理学分析筛选出73个潜在靶点,核心靶点包括热休克蛋白90α亚型A1(heat shock protein 90α isoform A1,HSP90AA1)、苏氨酸激酶1(serine/threonine kinase 1,AKT1)、细胞肉瘤基因(cellular sarcoma gene,SRC)和激酶插入结构域受体(kinase insert domain receptor,KDR)等,主要涉及磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路(phosphatidylinositol 3?kinase/protein kinase B signaling pathway,PI3K-Akt)及癌症相关通路;分子对接显示核心成分与靶点结合能均低于-20.92 kJ/mol;MTT实验证实桑黄多糖对Lewis肺癌细胞具有浓度依赖性抑制作用,IC50为0.31 mg/mL。

关键词： 辣木叶多糖   超声提取   抗氧化   吸湿   保湿  

摘要： 本文以辣木叶多糖提取率作为考察指标,设计正交试验优化提取工艺,通过检测清除羟基自由基、(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)DPPH自由基的能力来评价抗氧化活性,并以甘油为对照,测定辣木叶多糖在不同湿度下的吸湿率以及在干硅胶环境的保湿率。结果显示,在液料比为45mL/g、温度为60℃、功率为240W、时间为50min的最优工艺条件下,辣木叶多糖提取率达7.50%;质量浓度为1.0mg/mL的辣木叶多糖对羟基自由基和DPPH自由基的清除率分别为66.5%、71.9%;在43%、81%相对湿度条件下放置60h,辣木叶多糖的吸湿率分别为16.4%、33.1%;在干硅胶环境条件下放置60h,辣木叶多糖的保湿率为54.1%。结果证明,超声波法有利于辣木叶多糖的提取,辣木叶多糖具备成为天然抗氧化剂的潜力。

关键词： 枸杞多糖   荧光标记   药代动力学  

摘要： 本实验以纯化枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides, LBP)为研究对象,用荧光标记法研究枸杞多糖口服后在小鼠体内的血液吸收、组织分布和排泄特性。结果表明:枸杞多糖能够被异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate, FITC)和菁染料(Sulfo-Cyanine7, Cy7)成功标记。活体成像结果表明小鼠口服LBP-Cy7后,在小肠和肝脏部位有较强荧光强度,小肠在1 h时有最大荧光吸收,肝脏部位在6 h时有最大荧光吸收,多糖经小肠吸收后主要在肝脏蓄积。经过验证,LBP-FITC测量方法在血液、组织、粪便和尿液中具有良好的精密度(日内和日间相对标准偏差(Relative Standard Deviation, RSD)<15%)、稳定性(RSD<15%)和回收率(97.2%-100.8%)。小鼠单次灌胃50 mg/mL LBP-FITC后在血液中2 h时检测到最大吸收浓度,在血液中消除半衰期t1/2为8.67±1.23 h,消除缓慢;组织分布结果表明,灌胃后LBP-FITC主要分布在胃、小肠、大肠和肝脏中,组织分布排序为小肠>胃>大肠>肝>肾>肺>心>脾,并在肝脏中6 h达到最大蓄积量;灌胃后,在48 h以内,有87% LBP-FITC通过尿液和粪便排泄出去,并且大部分通过粪便排泄。

关键词： 鼻黏膜外胚层间充质干细胞   机械模量   衰老   piezo1   谷氨酰胺转胺酶2   甲基丙烯酸化明胶   成骨分化   纤维化  

摘要： 背景:细胞微环境的力学特性在调控鼻黏膜外胚层间充质干细胞命运中发挥着关键作用。目的:探讨机械模量对鼻黏膜外胚层间充质干细胞衰老过程的调控效应及潜在的分子机制。方法:配制50,100,150 g/L 3种质量浓度的甲基丙烯酸化明胶水凝胶,设置为低、中、高机械模量组,以普通培养板作为对照组。分离培养并鉴定SD大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞,以第5代细胞为起点种植于不同机械模量的水凝胶上,持续培养至第7代,并分别给予Piezo1激活剂(Yoda1)和谷氨酰转氨酶2抑制剂(KCC009)干预。采用RT-qPCR、免疫印迹和免疫荧光检测以下指标:衰老相关基因和蛋白(p16和p21)表达;增殖相关基因(Mki67、Pcna)表达;成骨分化标志物(Spp1、Sp7和Ⅰ型胶原蛋白)表达;Piezo1、钙离子及谷氨酰胺转氨2表达;纤维化相关蛋白(α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白)表达。采用β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞比例,碱性磷酸酶染色检测碱性磷酸酶活性,茜素红S染色检测钙结节形成情况。结果与结论:低机械模量水凝胶可显著下调衰老相关标志物p21和p16的表达,降低β-半乳糖苷酶阳性细胞比例,同时抑制细胞纤维化,增强成骨分化能力;相比之下,高机械模量水凝胶则呈现相反趋势。进一步研究发现,种植于高机械模量水凝胶上的鼻黏膜外胚层间充质干细胞中Piezo1表达上调,钙离子内流增强,谷氨酰胺转胺酶2表达升高。抑制谷氨酰胺转胺酶2表达可有效延缓高机械模量水凝胶所诱导的外胚层间充质干细胞衰老进程。结果表明:低机械模量微环境可逆转鼻黏膜外胚层间充质干细胞衰老,Piezo1/谷氨酰胺转氨2信号通路在此过程中发挥关键调控作用。

关键词： 急性肺损伤   脐带间充质干细胞   凋亡囊泡   巨噬细胞   炎症反应  

摘要： 目的 探究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)来源的凋亡囊泡(ApoVs)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)损伤及急性肺损伤(ALI)的治疗作用。方法 细胞实验中,采用100 LPS诱导MH-S细胞损伤,并给予不同浓度ApoVs(10~4~10~8 particles/ml)处理24 h,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;动物实验中,采用5 mg/kg LPS气管注射构建小鼠ALI模型,2 h后尾静脉注射不同剂量ApoVs(10、20、40μg/只),24 h后收集样本,通过苏木精-伊红染色法观察肺组织病理变化,RT-qPCR检测肺组织炎症因子及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)和血清炎症因子水平。结果 细胞实验显示,10~6、10~7 particles/ml ApoVs可降低MH-S细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达(P<0.05),10~8 particles/ml组未见明显改善。动物实验显示,10μg/只和20μg/只ApoVs治疗组肺组织病理评分降低(P<0.05),肺组织、BALF及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS、COX-2表达均下降(P<0.05),而40μg/只组未见明显改善。结论 hUCMSCs来源的ApoVs在细胞与动物水平均能有效缓解LPS诱导的感染性ALI,治疗效果并非随剂量升高而增强,存在最佳浓度窗口。