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关键词： 猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)   重组N蛋白   多克隆抗体   中和活性   免疫学特性  

摘要： 【目的】制备抗猫传染性腹膜炎病毒（Felineinfectiousperitonitisvirus，FIPV）全病毒灭活抗原与重组N蛋白多克隆抗体，评估其免疫原性，为FIPV诊断试剂及疫苗研发提供生物材料。【方法】使用猫肾细胞（CRFK）增殖FIPVWSU-79/1146毒株，经聚乙二醇（PEG8000）浓缩、60℃水浴热灭活获得全病毒灭活抗原。利用ExPASy等在线软件分析重组N蛋白的理化性质等信息，构建原核表达质粒pET-28a(＋)-N，表达并纯化重组N蛋白。将两种抗原分别与ICTYOLANE? 31佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠，制备抗FIPV全病毒及抗重组N蛋白多克隆抗体，采用ELISA测定抗体效价，Western blotting和IFA鉴定抗体特异性，病毒中和试验检测抗全病毒多克隆抗体的中和活性和交叉中和活性。【结果】获得浓度分别为6.00 mg/mL的FIPV全病毒灭活抗原和7.65 mg/mL的重组N蛋白；免疫小鼠成功获得抗FIPV全病毒多克隆抗体（效价为1∶12 800）和抗重组N蛋白多克隆抗体（效价为1∶25 600）。Western blotting结果证实两种抗体均能特异性识别47.4 ku 的重组N蛋白；IFA结果表明，两种抗体能分别与FIPV感染CRFK细胞及N蛋白转染的CRFK细胞靶抗原特异性结合。病毒中和试验显示，抗FIPV全病毒多克隆抗体对同源毒株FIPV WSU-79/1146的中和效价为1∶99，而对异源毒株FIPV DF2的交叉中和效价为1∶16。【结论】本研究成功制备了两种具有高反应性和特异性的FIPV多克隆抗体，其中抗全病毒多克隆抗体具备良好的中和活性及交叉保护潜力，为FIPV致病机制解析、血清学诊断方法及疫苗的开发奠定了物质基础。

摘要： 部分人群进食早餐后仍易出现饥饿感，其核心原因多为早餐蛋白质供给不足。蛋白质摄入匮乏不仅会提升肥胖发生风险，还会对胆囊健康产生不利影响。科学搭配早餐，对维持机体健康至关重要。早餐蛋白质摄入不足的潜在健康风险第一，肥胖发生风险升高。研究证实，提升早餐蛋白质供能比例，可有效降低全天能量摄入，超重人群的体重及体脂率下降更为显著。普通早餐或空腹状态下，体重更易呈上升趋势，且易因饥饿感诱发零食摄入过量。

关键词： 蛋白质   茶油   O/W型乳液   稳定性   乳化剂  

摘要： 探究4种天然蛋白质营养配料作为乳化剂对O/W型茶油乳液稳定性的影响，为蛋白质在茶油乳液体系中的应用提供理论依据。分别以酪蛋白酸钠（SC）、乳清分离蛋白（WPI）、豌豆分离蛋白（PPI）、大豆分离蛋白（SPI）为乳化剂制备O/W型茶油乳液，通过测定离心沉淀率、平均粒径、多分散指数（PDI）、Zeta电位、动力学不稳定性指数（TSI）、流变学特性、乳化特性及界面蛋白吸附量等指标，并结合4 ℃及室温条件短期贮藏测试，评价不同蛋白质对茶油乳液稳定性的影响效应。结果表明，酪蛋白酸钠-茶油乳液的离心沉淀率最低，为0.16%，界面蛋白吸附率、界面蛋白吸附量、乳化活性及乳化稳定性最高，分别为60.68%、21.38 mg/m2、11.31 m2/g和218.33 min，短期贮藏后乳液平均粒径为最小，为207.60 nm；流变学结果显示，各组乳液黏度随剪切速率增加而降低，均表现为剪切稀化的假塑性流体特性；贮藏期间，各组乳液平均粒径随贮藏时间延长而增大，微观形貌可观察到大粒径液滴及液滴聚集现象，低温贮藏可显著延缓此进程。综合各项评价指标，酪蛋白酸钠-茶油乳液在乳化性能、界面吸附性能及短期贮藏稳定性方面表现最优，是4种天然蛋白质中最适于O/W型茶油纳米乳液的乳化剂。

关键词： BCMA   单克隆抗体   单B细胞筛选技术   多发性骨髓瘤  

摘要： 目的 制备特异性人源B细胞成熟抗原（B-cell maturation antigen， BCMA）单克隆抗体。方法 构建pCDH表达质粒，转染HEK293T细胞获得人源BCMA-GFP融合蛋白；通过大肠杆菌原核表达系统获得人源BCMA蛋白，并免疫BALB/c小鼠。采用单B细胞筛选技术：将BCMA-GFP融合蛋白与免疫小鼠的脾脏细胞孵育，通过流式分选出针对BCMA特异性抗体的单B细胞。进一步通过聚合酶链式反应（PCR）扩增得到抗体轻链和重链基因，测序获得候选序列。将所得序列进行轻链和重链配对，构建pCDH真核表达质粒库。经HEK293T细胞表达、纯化获得单克隆抗体，流式分析技术检测其阳性结合率，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定效价。结果 经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定，约35kDa处出现明显目标条带，表明BCMA蛋白重组质粒构建成功；荧光显微镜显示转染细胞48小时后出现绿色荧光，表明BCMA-GFP融合蛋白成功表达；ELISA检测重组蛋白免疫小鼠血清，效价达到1∶105，表明小鼠已产生特异性体液免疫应答；琼脂糖凝胶电泳显示重链、轻链基因分别在1400bp、700bp处有明显条带，相互配对后经SDS-PAGE检测3株BCMA单克隆抗体（BCMA-mAb1G、BCMA-mAb1H、BCMA-mAb4C）在50kDa及25kDa处显示出目标条带，半定量检测浓度约2g/L，流式结果显示3株抗体与BCMA抗原的结合率均大于80%，其中BCMA-mAb1G为92.3%，ELISA检测显示抗体效价均为1:8。结论 BCMA是多发性骨髓瘤（MM）细胞表面特异性抗原，本研究制备的高阳性结合率BCMA单克隆抗体为MM的靶向治疗提供了重要工具，建立的单B细胞筛选技术平台也为后续相关抗体研发提供了技术支撑。

关键词： 微小隐孢子虫   原核表达   S60蛋白   单克隆抗体  

摘要： 旨在制备微小隐孢子虫S60蛋白的单克隆抗体并建立夹心ELISA检测方法。用原核表达系统表达的微小隐孢子虫S60蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、单克隆筛选及抗体鉴定后获得3株单克隆抗体，分别命名为G11-C2 E12、F2-B1 C11和B5-A9 G7。选择F2-B1 C11单克隆抗体作为检测抗体，兔抗微小隐孢子虫全虫多克隆抗体作为捕获抗体，建立夹心ELISA方法。特异性试验结果显示，该方法仅对微小隐孢子虫抗原呈阳性反应；敏感性试验结果显示，其可检出的微小隐孢子虫S60蛋白最低浓度为0.78 ng/mL；批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数（CV）均小于5.0%。将该方法与PCR检测法同时应用于100份临床样品检测，总符合率为94.00%。本研究成功建立了检测微小隐孢子虫的夹心ELISA方法，为微小隐孢子虫病防控技术研究提供了基础支撑。

关键词： 常压室温等离子体   微流控   单细胞筛选   灵芝多糖   菌株选育  

摘要： 【背景】灵芝多糖是灵芝中具有重要药理活性的成分，其工业化生产缺少适配液态发酵的高产菌株。然而，传统诱变筛选方法存在周期长（约30天）、通量低、劳动强度大的问题，使得优良菌株的选育效率低。【目的】建立一套高效、快速的高通量筛选体系，以加速获得高产灵芝多糖的优良菌株，提高育种效率。【方法】将常压室温等离子体诱变技术（ARTP）与微流控单细胞筛选技术融合，构建了一个从诱变到初筛仅需6天的集成化高通量筛选平台。首先利用ARTP对灵芝原始菌株G0023原生质体进行诱变，随后通过微流控技术将诱变菌株包裹形成单细胞液滴进行并行培养，并基于OD600监测快速筛选生长优势菌株。【结果】成功筛选出两株生长速率显著提升的突变菌株H2和G4。拮抗实验与分子鉴定证实其为灵芝属有效突变体，摇瓶传代实验表明其遗传性状稳定。在3L发酵罐中，突变株H2和G4的生物量（干重）较原始菌株G0023分别显著提升8.6%和23.2%，其灵芝多糖产量分别高出13.4%和28.8%。【结论】成功建立了一套高效的灵芝高产菌株高通量筛选体系，将筛选效率提升约5倍。该体系为灵芝乃至其他食药用真菌的定向育种 提供了新的高效的技术方案。

关键词： 分枝杆菌   结核   PCR-胶体金法   诊断技术和方法   诊断效能  

摘要： 目的 验证结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌双联核酸胶体金技术（以下简称PCR-胶体金法）用于临床肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的诊断效能，评估PCR-胶体金法对结核病的辅助诊断价值。方法 收集2024年7月1日—2025年5月31日南通市4家结核病定点医疗机构登记的239例活动性肺结核患者痰标本，对同一份痰标本分别开展痰涂片、GeneXpert和PCR-胶体金法检测结核分枝杆菌。比较3种方法检测不同类型患者阳性率差异，分别以GeneXpert结果和临床综合诊断为参照标准，评价PCR-胶体金法诊断效能。结果 239例肺结核患者中确诊肺结核（病原学阳性）111例（46.44%）、临床诊断（病原学阴性）128例（53.56%）。痰涂片阳性检出率30.96%(74/239)、GeneXpert阳性检出率43.93%(105/239)、PCR-胶体金法阳性检出率51.05%(122/239)。至少2种方法的结核分枝杆菌阳性检出率差异有统计学意义（P<0.001）。进一步分析发现，总体患者中，GeneXpert和PCR-胶体金法结核分枝杆菌阳性检出率均高于痰涂片法，差异有统计学意义，但GeneXpert和PCR-胶体金法结核分枝杆菌阳性检出率差异无统计学意义。以GeneXpert结果为标准，PCR-胶体金法与痰涂片法的敏感度分别为96.19%(95%CI:90.53%～98.95%)、66.67%(95%CI:56.80%～75.57%)；特异度分别为84.33%(95%CI:77.05%～90.03%)和97.01%(95%CI:92.53%～99.18%)；阳性预测值分别为82.79%(95%CI:75.07%～88.93%)和94.59%(95%CI:86.76%～98.51%)；阴性预测值分别为96.58%(95%CI:91.56%～99.06%)、78.79%(95%CI:71.89%～84.70%)。PCR-胶体金法与GeneXpert检测整体一致性较好（Kappa=0.791），明显高于痰涂片（Kappa=0.658）。以临床诊断结果为参照标准，PCR-胶体金法敏感度分别为95.50%(95%CI:89.97%～98.54%)、特异度87.50%(95%CI:80.50%～92.73%)、一致率91.21%(95%CI:86.77%～94.61%),Kappa值分别为0.825(95%CI:0.758～0.892)。结论 PCR-胶体金法与临床诊断一致性高，具有与GeneXpert同等的诊断效能，可提升疑似肺结核患者痰标本的阳性检出率。其具有结果读取方便直观、成本较低、操作步骤简洁、对实验室环境要求低等优势，适合在基层医疗机构推广应用早期临床肺结核诊断方法。

关键词： 丝素蛋白   白芨多糖   壳聚糖   多孔海绵   乙醇后处理  

摘要： 本研究以丝素蛋白（SF）、白芨多糖（BSP）和壳聚糖（CS）为原料，重点探讨三者复合多孔海绵的制备的可行性，系统研究组分配比对材料理化性能的调控规律，并深入分析乙醇后处理工艺对材料微观结构与核心性能的影响机制。采用不同配比的SF、BSP和CS进行物理共混，通过冷冻干燥工艺制备系列多孔海绵。通过多种测试方法，分析样品的化学结构、微观形态、孔隙率、吸水溶胀性、力学性能以及体外降解性能，明确组分配比、乙醇后处理与材料结构、性能之间的内在关联。结果表明，乙醇后处理可诱导丝素蛋白构象由无规卷曲和α-螺旋向稳定的β-折叠转变，从而显著提升复合海绵的水稳定性和力学性能；所制备的复合海绵呈三维贯通的多孔网络结构，孔隙率均在97%以上；材料表现出优异的吸液性能（平衡吸水量达自身干重的10～20倍）及良好的保水率，兼具优良的抗压回复性能、体外酶降解特性与良好凝血功能。通过调控SF、BSP、CS三者的配比关系，可实现复合多孔海绵各项性能的定向调控，并阐明了组分-结构-性能之间的构效关系，为设计多功能生物医用多孔材料提供了新的设计思路和实验依据。

关键词： 种子萌发   活性氧   镉   胞外多糖  

摘要： 采用水培法研究了胞外多糖（exopolysaccharides， EPS）对镉（Cd）胁迫下水稻种子萌发过程中生长发育和糖代谢的影响，并以活性氧（reactive oxygen species， ROS）抑制剂为工具，探索了ROS作为信号分子在这一过程中的作用。结果表明，Cd处理会严重抑制水稻种子的萌发，对根部的抑制效应尤为显著。添加EPS会显著改变Cd胁迫下水稻种子根部的构型，促进根长的延伸。ROS是种子萌发过程中的重要调控因子，ROS水平降低会严重抑制水稻根部的发育。Cd胁迫对种子萌发过程中的淀粉酶活性有一定的促进作用，同时严重影响糖酵解途径的关键酶活性和葡萄糖等单糖的含量；而添加外源EPS显著改变了Cd胁迫下丙酮酸激酶和果糖-6-磷酸激酶的活性，说明水稻通过提高淀粉降解水平并调控糖代谢来应对外界Cd胁迫。ROS水平的降低也会导致总淀粉酶和β-淀粉酶活性升高，同时对糖代谢速率有显著影响，但在水稻萌发的不同阶段，ROS对水稻种子糖酵解途径的调节效应呈现不同趋势。综合上述结果表明，EPS可有效缓解Cd对水稻种子萌发的抑制效应，尤其对根部构型的影响更为显著；对糖代谢的调控可能是多糖类物质发挥生物学活性的重要途径之一，同时ROS可能在此过程中发挥了重要的信号分子作用。

关键词： 弓形虫   ROP1蛋白   截短蛋白   多克隆抗体  

摘要： 【目的】制备弓形虫ROP1鼠源和兔源多克隆抗体，检测其抗体效价及特异性，为弓形虫感染机制的研究提供理论支持【方法】利用生物信息学软件预测弓形虫ROP1蛋白的理化性质；结合ABCpred和IEDB平台分别筛选其B、T细胞优势表位，利用NCBI网站预测其保守结构域，筛选出高免疫原性截短蛋白区域（jdROP1）。构建重组质粒pET-jdROP1，诱导表达重组截短蛋白jdROP1（rjdROP1）。Western blotting检测重组蛋白的反应原性。将纯化的rjdROP1免疫小鼠和新西兰大白兔，制备多克隆抗体并检测其效价和特异性。【结果】ROP1蛋白由447个氨基酸组成，分子质量约47.9 ku，等电点为5.63，整体呈亲水性且稳定性较低；该蛋白不含信号肽及跨膜结构，存在18个丝氨酸、8个苏氨酸和2个酪氨酸潜在磷酸化位点，未检测到N-糖基化位点；二级结构以无规则卷曲为主，三级结构模型评估结果表明其结构预测可靠；分子对接分析提示ROP1与TLR4具有潜在相互作用能力；结构域分析显示其含有与ECM1和Atrophin-1相似的保守结构域，且171－272位氨基酸区域富含优势T细胞和B细胞表位，因此选取该区域作为截短ROP1蛋白片段。pET-jdROP1经PCR和双酶切鉴定显示，在306 bp处出现特异性目的条带。SDS-PAGE与Western blotting检测结果发现，成功表达出分子质量大小为37 ku的目的蛋白。制备的小鼠和兔抗rjdROP1抗体效价均可达1∶32 000，且多克隆抗体能特异识别弓形虫ROP1蛋白。【结论】获得了弓形虫ROP1的生物信息特征，成功表达截短重组蛋白rjdROP1，制备出鼠源和兔源抗弓形虫ROP1多克隆抗体，研究结果为弓形虫ROP1后续蛋白定位、表达检测及相互作用研究提供试验工具，也为相关诊断方法开发及疫苗靶标筛选提供基础资料。