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关键词： 豌豆   超声波   功率   蛋白质   功能特性   结构  

摘要： 为了探究不同超声波功率（100、300、500 W；处理时间30 min）对豌豆蛋白的功能特性与结构的影响,采用化学分析和仪器表征的方法，研究超声波处理前后的豌豆蛋白的溶解性，Zeta电位，乳化特性，平均粒径、蛋白质二级结构与三级结构的变化。结果表明，100 W超声波处理的豌豆蛋白样品具有最高的溶解度（98.97%±1.02%）、最高的乳化活性[（1 124.93±14.69）m2/g]。300 W超声波处理的豌豆蛋白样品具有最好的乳化稳定性（0.036±0.003）。500 W超声波处理的豌豆蛋白样品具有最小的平均粒径（94.75±1.99 nm）。研究可以促进超声波改性豌豆蛋白的开发和利用。

关键词： 光老化   间充质干细胞   大鼠真皮成纤维细胞  

摘要： 目的 探究脂肪间充质干细胞（ADMSCs）与脐带间充质干细胞（UCMSCs）对光老化大鼠真皮成纤维细胞（RDFs）的作用。方法 选取SD大鼠RDFs，实验设4组：Control组，RDFs不给予中波紫外线（UVB）辐照；UVB组，RDFs予以UVB辐照；ADMSCs组、UCMSCs组，UVB辐照RDFs后分别与对应干细胞体外共培养。采用细胞增殖检测、衰老相关染色分析、细胞划痕实验、流式细胞术及免疫荧光等方法，比较 ADMSCs、UCMSCs对光老化RDFs模型的影响。结果 ADMSCs、UCMSCs均呈典型长梭形，表达相似表面标志物；成骨、成脂、成软骨三系分化染色后，依次可见橘红色钙结节、橙红色脂滴与蓝色细胞团块。与Control组相比，UVB组衰老的RDFs 比例、G1期比例、ROS水平和 γ-H2Ax阳性率均明显升高（P<0.05），迁移率和S期比例明显降低（P<0.05）。与UVB组相比，ADMSCs组和UCMSCs组细胞活力、迁移率及S期比例升高，衰老的RDFs 比例、G1期比例、ROS水平与γ-H2Ax阳性率明显降低（P<0.05）；且 UCMSCs组与 ADMSCs组相比，细胞活力与迁移率、G1期占比更高，S期占比更低（P<0.05）。结论UCMSCs在促进光老化RDFs增殖与迁移方面效果更优，ADMSCs改善细胞周期阻滞作用更强；二者在抗衰老、降氧化应激及维持DNA 完整性方面的作用相近。

关键词： 加味小青龙汤   支气管哮喘   BMSCs   巨噬细胞极化   气道炎症   TLR4/NF-κB信号通路  

摘要： 目的 探讨加味小青龙汤改善骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植后哮喘大鼠气道炎症的作用机制。方法 将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、BMSCs模型组、BMSCs加味小青龙汤组、BMSCs地塞米松组，采用OVA致敏激发，并予空调冷风吹袭，建立寒性哮喘大鼠模型，尾静脉注射BMSCs，建立BMSCs模型，并分别予加味小青龙汤和地塞米松治疗1周，记录大鼠哮喘行为学改变，HE染色观察肺组织病理变化，ELISA检测肺泡灌洗液（BALF）中IL-6和IL-10水平，免疫荧光单染检测肺组织中CD86、CD206阳性表达，Western blot检测肺组织中TLR4、NF-κB相关蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠哮喘行为学评分显著升高（P<0.01）；肺组织可见大量炎性细胞浸润、肺泡及支气管结构破坏、肺间质增生；BALF中IL-6水平显著升高，IL-10水平显著降低（P<0.01）；肺组织CD86相对荧光强度显著增强，CD206相对荧光强度显著减弱（P<0.01）;TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达显著上调（P<0.01）。与模型组相比，BMSCs模型组、BMSCs加味小青龙汤、BMSCs地塞米松组哮喘大鼠哮喘行为学评分明显减少（P<0.05）；肺组织炎性损伤与结构破坏减轻；BALF中IL-6水平降低且IL-10水平显著升高（P<0.05,P<0.01）；肺组织CD206荧光强度显著增强，而p-NF-κB p65蛋白表达明显减少（P<0.01,P<0.05）;BMSCs加味小青龙汤组和BMSCs地塞米松组肺组织CD86荧光强度明显降低，TLR4蛋白表达明显减少（P<0.05）。与BMSCs模型组比较，BMSCs加味小青龙汤组及BMSCs地塞米松组大鼠哮喘行为学评分明显降低（P<0.05）；肺组织炎性细胞浸润进一步减少，肺泡结构破坏情况改善；BALF中IL-6水平降低，IL-10水平升高（P<0.05,P<0.01）；肺组织CD86荧光强度明显降低，而CD206荧光强度增强（P<0.01,P<0.05）。结论 加味小青龙汤能够平衡BMSCs移植后哮喘大鼠肺组织巨噬细胞极化水平，改善气道炎症，这可能与其调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

关键词： 芳香族L-氨基酸脱羧酶   多巴胺脱羧酶   功能冗余   自我补偿机制   异色瓢虫  

摘要： 【目的】探讨芳香族L-氨基酸脱羧酶（aromatic L-amino acid decarboxylase, AADC）活性关键位点赖氨酸突变后的自我补偿机制，揭示其功能冗余策略的分子基础。【方法】以异色瓢虫（Harmonia axyridis）多巴胺脱羧酶（dopamine decarboxylase,HaDDC）为研究对象，采用原核表达与纯化技术获得重组HaDDC；通过体外酶活测试与酶促动力学分析考察底物特异性及催化效率；结合分子对接与点突变技术及跨物种序列比对，解析关键氨基酸残基的功能及催化机制。【结果】HaDDC仅能催化5-羟色氨酸（5-hydroxytryptophan, 5-HTP）和左旋多巴（levodopa, L-DOPA），对L-色氨酸（L-tryptophan, L-Trp）、L-酪氨酸（L-tyrosine, L-Tyr）及L-苯丙氨酸（L-phenylalanine, L-Phe）无催化活性。重组HaDDC以5-HTP为底物的Km、Vmax、kcat和kcat/Km值分别为0.27 mmol/L、1.38μmol/（L·min）、0.32/min、1.19 mmol/（L·min）。分子对接结合点突变技术，明确K303是HaDDC的关键活性氨基酸，A148-H192-H302是构成HaDDC中PLP结合的关键氨基酸，W71,W82,H302是5-HTP与HaDDC结合的关键氨基酸。当活性位点保守赖氨酸K303突变后，H192与H302通过协同作用维持PLP辅因子的活化构象，补偿了K303缺失导致的催化缺陷。跨物种分析显示，“双组氨酸冗余”结构在微生物、植物和动物的AADC家族中高度保守。【结论】HaDDC在活性位点K303突变后通过双组氨酸H192和H302功能冗余策略实现酶活性自我补偿。

关键词： 黄芩   SbMYB113-like   低温胁迫   生理特性   生物信息学分析   RT-qPCR   功能验证   本氏烟草  

摘要： 【目的】探究黄芩SbMYB113-like基因在低温胁迫中的功能，为提高黄芩耐低温育种提供可用的基因资源。【方法】从黄芩中克隆SbMYB113-like基因，并对其理化性质、蛋白结构以及进化关系进行生物信息学分析。实时荧光定量PCR(RTqPCR)分析SbMYB113-like基因在黄芩不同组织以及低温胁迫处理下的表达特征。通过亚细胞定位明确其表达位置。再通过农杆菌侵染法在本氏烟草中异源表达SbMYB113-like基因，并对转基因植株进行低温处理后的表型、抗氧化物酶活性测定。【结果】SbMYB113-like的CDS长度为252 bp，编码83个氨基酸，具备MYB基因家族特征保守结构域；蛋白质结构预测结果表明，该蛋白的相对分子质量为9.88 kD，理论等电点为9.59，不稳定系数为30.78，属于亲水性蛋白。SbMYB113-like蛋白序列中无信号肽结构、无跨膜结构域，二级结构以无规则卷曲为主，还包含少部分的α-螺旋。SbMYB113-like启动子上存在ABRE、STRE、MBS、W-box等多种与胁迫相关的顺式作用元件。RT-qPCR结果表明，SbMYB113-like主要在花中表达，其次是叶，在根中表达量最低；且在低温胁迫处理下呈现先升高后降低的表达趋势。亚细胞定位结果显示，SbMYB113-like蛋白定位在细胞膜。转基因功能验证表明，低温胁迫下野生型本氏烟草表型优于转基因本氏烟草，转基因植株表现出更高的膜脂过氧化水平以及更低抗氧化酶活性（SOD、CAT、POD）。【结论】过表达SbMYB113-like显著降低本氏烟草低温抵抗能力，表明该基因在低温胁迫中可能作为负调控因子发挥作用。

摘要： 我国传统肉鸡养殖普遍采用高蛋白日粮模式，导致饲料蛋白利用效率偏低和蛋白资源的浪费，同时还增加了畜禽粪便的氮排泄量，降低了动物福利水平。近年来，随着国家政策的引导和产业发展需求，低蛋白日粮氨基酸平衡技术受到越来越多的关注。通过精准下调日粮粗蛋白质水平，同时补充关键的必需氨基酸，使日粮氨基酸模式与黄羽肉鸡营养需求更加匹配，提高肉鸡养殖的经济效益。

关键词： 瑞芬太尼   右美托咪定   脓毒症相关性脑病   炎症  

摘要： 目的 探讨瑞芬太尼(REM)联合右美托咪定(DEX)对脓毒症相关脑病(SAE)大鼠的干预效果。方法 将50只Wistar雄性大鼠按随机数表法分为5组:空白对照组(Con组)、脂多糖(LPS)组、DEX+LPS组、REM+LPS组、DEX+REM+LPS组,每组10只。除Con组外,其余各组均腹腔注射LPS(10 mg/kg)制备SAE模型。3 h后,Con组和LPS组给予2 mL生理盐水,DEX+LPS组注射DEX 100μg/kg,REM+LPS组注射REM3μg/kg,DEX+REM+LPS组注射DEX 100μg/kg和REM 3μg/kg。通过Morris水迷宫实验及大鼠脑组织尼氏染色和Fluoro-Jade C(FJC)染色、ELISA检测、蛋白质印迹法检测,评价REM与DEX联合用药对SAE大鼠的干预效果。结果 Morris水迷宫实验结果显示,相较于Con组,LPS组大鼠逃避潜伏期显著延长,平台穿越次数、目标象限停留时间明显减少(P<0.05,P<0.01);相较于LPS组,DEX、REM单独干预组大鼠上述行为学指标均得到改善,联合用药组(DEX+REM+LPS组)改善效果更优。脑组织病理染色结果表明,与Con组比较,LPS组大鼠海马及皮质组织尼氏染色阳性神经元数量减少,FJC染色阳性神经元数量增多(均P<0.01);各药物干预组均可逆转神经元损伤、缓解神经元退行性病变,联合用药组神经元修复效果最佳。ELISA检测结果显示,LPS组大鼠海马及皮质组织TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子表达水平均较Con组升高(均P<0.01);DEX、REM单独及联合干预均可抑制脑组织炎症因子的表达,联合用药抗炎作用最优。蛋白质印迹法检测结果显示,LPS组大鼠海马组织磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/eNOS蛋白相对表达水平均较Con组降低(P<0.05,P<0.01);各药物干预组均可激活PI3K/Akt/eNOS信号通路,上调蛋白磷酸化水平,且DEX与REM联合用药对通路的激活效果显著优于单药干预。结论 单一使用REM或DEX可减轻LPS诱导的SAE大鼠的脑病症状,两者联用效果更佳。其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路、抑制海马和皮质区域神经炎症反应、减轻神经元退行性病变有关。

关键词： 黄芪多糖   5-氟尿嘧啶   结直肠癌   化疗增敏   Wnt/β-catenin通路  

摘要： 目的 探讨黄芪多糖（APS）对人结直肠癌HCT116细胞5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的影响，并基于Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路探讨其潜在机制。方法 分别用不同浓度APS（0,50,100,200,400,800μg/m L）和5-FU（0,1,2,4,8,16μg/m L）干预对数生长期HCT116细胞48 h，筛选APS和5-FU的合适浓度。将HCT116细胞分为对照组、APS组（92.75μg/m L APS）、5-FU组（4.28μg/m L 5-FU）、二联组（92.75μg/m L APS+4.28μg/m L 5-FU）和三联组（92.75μg/m L APS+4.28μg/m L 5-FU+6μg/m L SKL2001）。平板集落形成实验评估细胞增殖活力，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，GFP-LC3质粒转染实验检测细胞自噬情况，Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin通路及凋亡、自噬相关蛋白表达情况。结果APS对HCT116细胞半抑制浓度(IC50 APS)为92.75μg/m L,5-FU对HCT116细胞半抑制浓度(IC50 5-FU)为4.28μg/m L，以此作为本实验APS和5-FU的浓度。与对照组比较，各给药组HCT116细胞集落形成率、存活率均明显降低（P均<0.05），细胞凋亡率、自噬体数目均明显升高（P均<0.05）;与APS组、5-FU组和三联组比较，二联组HCT116细胞集落形成率、存活率均更低（P均<0.05），细胞凋亡率、自噬体数目均更高（P均<0.05）。与对照组比较，APS组、二联组和三联组Wnt3a、β-catenin、Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低（P均<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显升高（P均<0.05）;与5-FU组和三联组比较，二联组Wnt3a、β-catenin、Bcl-2蛋白相对表达量均更低（P均<0.05）,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均更高（P均<0.05）;且二联组Cleaved Caspase-3蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显高于APS组（P均<0.05）。结论 APS可增强人结直肠癌HCT116细胞对5-FU化疗敏感性，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路而促进HCT116细胞凋亡和自噬有关。

摘要： 聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术已成为病原体检测、基因分型、遗传病诊断等领域的金标准。其中，从复杂样本（如血液、痰液、拭子）中高效、纯净地提取核酸，是确保检测成功的首要环节。目前主流方法为固相萃取法，包括基于硅胶膜吸附的离心柱法和基于磁性颗粒吸附的磁珠法。尽管已实现自动化，但这些方法仍存在固有局限：操作步骤多、耗时长、需要专用仪器与耗材，且在吸附、洗涤、洗脱过程中不可避免地造成核酸损失，回收率通常为50%～85%。这不仅降低了检测灵敏度，也增加了珍贵样本的检测风险与成本。

关键词： 党参多糖   提取   抗肿瘤活性   免疫调节   抗氧化活性   护肝   抗炎作用   调节肠道菌群  

摘要： 党参多糖作为党参的活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗衰老、调节免疫等药理活性。通过查阅文献，对党参多糖的提取工艺和药理活性进行综述，阐明了党参多糖的药理作用机制，为其临床应用及产品开发提供了依据。