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关键词： 猪流行性腹泻   蛋白质纳米颗粒   基因工程技术   疫苗  

摘要： 猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种高度接触性肠道传染性疾病，给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗接种是预防PED的有效措施之一，但随着PEDV毒株的持续变异，给临床上PED疫苗的研制带来了严峻挑战。蛋白质纳米颗粒疫苗具有生物安全性好、免疫原性强以及可精准递呈抗原表位等优势，是新型疫苗研发的重要方向。近年来，基于病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）、铁蛋白（ferritin）、AP205及mi3等自组装纳米载体的蛋白质纳米颗粒疫苗研究取得重要进展。本文系统综述了基于PEDV刺突蛋白（spike,S）为核心抗原的疫苗设计，重点阐述了基于结构蛋白自组装VLPs、基因融合策略构建的纳米颗粒及SpyCatcher/SpyTag抗原展示系统构建纳米颗粒疫苗的研究进展，并展望了多价嵌合型纳米颗粒设计、靶向保守抗原S2亚基及黏膜免疫增强策略等未来研究方向，旨在为开发安全、高效、广谱的PED新型疫苗提供理论参考。

关键词： ZaPDS基因   基因克隆   表达分析   病毒诱导的基因沉默(VIGS)  

摘要： 为评估马蹄莲(Zantedeschia aethiopica) ZaPDS基因作为功能研究靶基因及病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing， VIGS)报告基因的分子基础，本研究以白花马蹄莲为材料开展试验。研究通过PCR扩增ZaPDS基因完整ORF序列(1 731 bp)，其编码576个氨基酸，生物信息学分析显示，该蛋白分子量为65 kD，等电点为7.93，无信号肽序列，不稳定指数为43.73 (不稳定蛋白)，亲水性为-0.048 (亲水性蛋白)，三级结构与水稻PDS高度相似，亚细胞定位以内质网(0.540 3)和高尔基体(0.387 6)为主。实时荧光定量PCR结果表明ZaPDS在马蹄莲根、茎、叶中均有表达，叶中表达最高，根中最低。同时，本研究构建了基于烟草脆裂病毒(TRV)的ZaPDS基因沉默载体。上述结果为ZaPDS基因的功能研究奠定了分子基础，并提示其作为马蹄莲VIGS体系可视化标记基因的潜在应用价值。

关键词： 微小核糖核酸   结肠炎, 溃疡性   多态性, 单核苷酸   维得利珠单克隆抗体  

摘要： 目的分析微RNA基因多态性对溃疡性结肠炎(UC)发病风险及维得利珠单克隆抗体(VDZ)临床疗效的影响。方法回顾性收集2018年1月至2025年1月在温州医科大学附属第二医院消化内科确诊的419例UC患者(UC组)及行健康体检的507名健康对照者(健康对照组)。检测患者微RNA-155(rs767649)、微RNA-21(rs13137)、微RNA-124(rs531564)和微RNA-146a(rs57095329)的基因型。通过蒙特利尔UC分类标准疾病部位分型, 将UC组患者分为远端结肠型(包括直肠型和左半结肠型)和广泛结肠型。通过改良梅奥评分评估UC患者的临床活动度, 梅奥内镜评分评估内镜活动度。VDZ治疗第14周时依据部分梅奥评分评估临床应答情况, 第32周时依据改良梅奥评分评估临床缓解、梅奥内镜评分评估黏膜愈合情况。采用非条件logistic回归分析微RNA基因多态性的分布差异, 并校正年龄、性别、吸烟等因素。结果 UC组中118例患者接受VDZ一线治疗, 其中治疗第14周65例达到临床应答;治疗第32周58例达到临床缓解, 55例达到内镜下黏膜愈合。UC组中rs767649突变基因型TA+AA和突变等位基因A的频率均高于健康对照组, 差异均有统计学意义[OR=1.41、1.26, 95%置信区间(95%confidence interval, 95%CI): 1.09～1.84、1.04～1.53, P校正=0.018、0.038];rs13137突变基因型AT+TT和突变等位基因T的频率均高于健康对照组, 差异均有统计学意义(OR=1.55、1.33, 95%CI:1.17～2.06、1.11～1.60, 均P校正=0.008);rs57095329突变基因型AG+GG和突变等位基因G的频率均高于健康对照组, 差异均有统计学意义(OR=1.50、1.37, 95%CI:1.15～1.96、1.09～1.72, P校正=0.009、0.021)。广泛结肠型患者中rs767649纯合子突变基因型AA和突变等位基因A的频率均低于远端结肠型患者, 差异有统计学意义(OR=0.18、0.61, 95%CI:0.08～0.42、0.46～0.82, P校正<0.001、=0.004);rs531564突变基因型GC+CC和突变等位基因C的频率均高于远端结肠型患者, 差异有统计学意义(OR=2.13、1.77, 95%CI:1.38～3.30、1.21～2.58, P校正=0.004、0.009);rs57095329纯合子突变基因型GG的频率高于远端结肠型患者, 差异有统计学意义(OR=5.18, 95%CI:1.66～16.17, P校正=0.006)。中重度UC患者中rs767649纯合子突变基因型AA和突变等位基因A的频率均低于轻度UC患者, 差异有统计学意义(OR=0.36、0.64, 95%CI:0.20～0.63、0.47～0.85, P校正<0.001、=0.012)。VDZ治疗第14周时, 临床应答者中rs767649突变基因型TA+AA的频率低于无应答者, 差异有统计学意义(OR=0.35, 95%CI:0.16～0.78, P校正=0.040);rs57095329突变基因型AG+GG和突变等位基因G的频率均低于无应答者, 差异均有统计学意义(OR=0.36、0.39, 95%CI:0.16～0.80、0.20～0.78, P校正=0.040、0.028)。VDZ治疗第32周时, 临床缓解者中rs767649突变基因型TA+AA的频率低于未缓解者, 差异有统计学意义(OR=0.33, 95%CI:0.15～0.69, P校正=0.016);临床缓解者中rs57095329突变基因型AG+GG和突变等位基因G的频率均低于未缓解者, 差异均有统计学意义(OR=0.30、0.33, 95%CI:0.13～0.67、0.16～0.67, P校正=0.016、0.008)。VDZ治疗第32周时, 黏膜愈合者中rs767649突变基因型TA+AA的频率低于黏膜未愈合者, 差异有统计学意义(OR=0.31, 95%CI:0.15～0.66, P校正=0.012);黏膜愈合者中rs57095329突变基因型AG+GG和突变等位基因G的频率均低于黏膜未愈合者, 差异均有统计学意义(OR=0.29、0.33, 95%CI:0.13～0.67、0.16～0.67, P校正=0.012、0.008)。结论 rs767649、rs13137和rs57095329基因突变可能均为UC发病的危险因素。rs767649基因突变可能与广泛结肠炎发病风险降低和UC临床活动度降低相关。rs57095329和rs531564基因突变可能与广泛结肠

关键词： 石仙桃   天麻素   糖基转移酶   大肠杆菌   酵母  

摘要： 【目的】发掘石仙桃中天麻素生物合成最后关键步骤的糖基转移酶基因，为利用工程菌高效生产天麻素奠定基础。【方法】采用双酶切法，克隆候选基因transcript28360/f2p0/1592(1592)和transcript17418/f3p0/2174(2174)，以AsUGT为阳性对照，在大肠杆菌和酵母中进行表达。【结果】基因2174由1 413个核苷酸组成，编码470个氨基酸，大小约为51.12 kD，主要位于叶绿体中。基因1592由1 395个核苷酸组成，编码464个氨基酸，大小约为50.85 kD，主要位于细胞质中。3个酶催化天麻苷元的活性中心均有亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、谷氨酸等残基，可能是催化天麻苷元形成天麻素的关键活性残基。在大肠杆菌和酵母中表达表明，基因2174具有较高的催化天麻苷元生成天麻素的活性，是对照基因AsUGT的2.31-3.39倍，而基因1592具有较弱的催化活性。【结论】石仙桃中糖基转移酶基因2174和1592催化天麻苷元生成天麻素过程中存在活性差异，基因2174可作为工程菌生产天麻素关键酶的候选基因。

关键词： 中国参与者   破伤风单克隆抗体   GR2001注射液   药动学   药效学  

摘要： 目的 进行新型破伤风单克隆抗体GR2001注射液Ⅰ/Ⅱ期临床试验，评价其在中国成年参与者中的安全性、耐受性、药动学特征、药效学特征和免疫原性。方法 采用多中心、随机、双盲、对照、多队列的临床试验设计，纳入中国健康成年参与者202例，进行GR2001注射液单药Ⅰ/Ⅱ期临床试验，包括剂量递增试验（Ⅰ期临床试验第1阶段：评价不同剂量GR2001注射液的安全性、耐受性）、GR2001注射液联合吸附破伤风疫苗相互作用试验（Ⅰ期临床试验第2阶段：评价不同剂量GR2001注射液联合吸附破伤风疫苗的安全性、耐受性）和GR2001注射液和破伤风人免疫球蛋白联合吸附破伤风疫苗的对比试验（Ⅱ期临床试验：比较不同剂量GR2001注射液和破伤风人免疫球蛋白联合或不联合吸附破伤风疫苗的药效学特征）。结果 共有200例参与者完成试验，均未发生重度、严重、导致退出和死亡的不良事件。200例参与者单次肌内注射不同剂量的GR2001注射液后，血药浓度在7.0～14.5 d达峰，药物暴露量随剂量升高，基本呈线性关系；联合吸附破伤风疫苗不改变其药动学特征。GR2001注射液起效迅速，联合或不联合吸附破伤风疫苗的抗破伤风毒素中和抗体阳性率均为100%，抗破伤风毒素中和抗体水平≥0.01 U·mL-1能够自给药结束后24 h起维持整个试验周期。GR2001注射液单药使用未发现抗药抗体阳性，与吸附破伤风疫苗联用抗药抗体阳性率较低。结论 GR2001注射液对中国成年参与者的安全性和耐受性良好，药物暴露量随给药剂量增加，基本呈现线性特征，起效迅速，持续时间长，联用吸附破伤风疫苗对主动免疫的影响可控。

关键词： MiT/TFE   USFs   转录因子   蛋白结构   小分子抑制剂   癌症  

摘要： 小眼畸形/转录因子E(MiT/TFE)与上游刺激因子（USFs）亚家族同属碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链（basic Helix-Loop-Helix Leucine zipper,bHLH-LZ）转录因子超家族，是调控细胞生理稳态与疾病进展的关键枢纽。MiT/TFE家族包含MITF、TFE3、TFEB、TFEC四个成员，其标志性结构特征为亮氨酸拉链（LZ）区存在3个氨基酸插入，可形成动态二聚体；该家族通过自噬-溶酶体通路，调控细胞代谢应激与组织特异性功能。USFs家族涵盖USF1、USF2两个成员，依托LZ-Ext模块介导的稳定四聚体构象，通过DNA成环机制提升转录效率，进而参与基础转录调控与多系统稳态维持。两家族功能异常与癌症、代谢疾病、免疫紊乱等密切相关，其独特结构域为靶向治疗提供了重要靶点。本文系统综述了MiT/TFE与USFs家族的发现历程、成员特征、结构与功能关联及病理意义，重点阐述了小分子抑制剂的开发策略与进展，最后展望了该领域未来的研究方向及临床转化应用前景，以期为相关疾病的精准医学实践提供理论依据与创新思路。

关键词： 间充质基质细胞   肺纤维化   上皮间质转化   凋亡  

摘要： 目的 比较气管内与尾静脉给药人羊膜间充质基质细胞(hAMSCs)对肺纤维化小鼠模型上皮间质转化(EMT)及凋亡的影响。方法 体外分离培养原代hAMSCs,流式细胞术鉴定表面标志物如CD44、CD90、CD105等表达。采用气管内注射博来霉素(BLM)构建肺纤维化小鼠模型，将小鼠随机分为对照组、模型组(BLM)、BLM+气管内给药hAMSCs组、BLM+尾静脉给药hAMSCs组、BLM+尼达尼布组及单纯hAMSCs组。造模21 d时，通过HE染色观察肺泡结构，免疫荧光及免疫印迹(WB)检测E-cadherin和Vimentin表达，TUNEL染色检测肺组织中细胞凋亡情况，小动物活体成像追踪Dir标记的hAMSCs在体内的存留时间。结果 流式细胞术证实所培养细胞高表达CD44、CD73、CD90及CD105,低表达CD11b、CD34、CD45、CD19。与模型组相比，尾静脉给药组与气管内给药组的E-cadherin表达均上调(P<0.05),Vimentin表达及TUNEL阳性细胞率均下调(P<0.05)。与尾静脉给药组相比，气管内给药组的TUNEL阳性细胞虽呈下降趋势，但差异无统计学意义(P>0.05);两组间E-cadherin及Vimentin表达亦无显著差异(P>0.05)。活体成像显示：气管内给药后，标记的hAMSCs在肺内至少可存留7、14 d时信号基本消失；尾静脉给药后细胞存留约5、7 d时信号消失。结论 尾静脉与气管内给药hAMSCs均可显著改善肺纤维化模型小鼠的EMT及细胞凋亡，两种给药途径总体疗效相当。提示除常规的尾静脉给药外，气管内给药可作为一种具有潜力的给药途径。

关键词： B型产气荚膜梭菌   荚膜多糖   转录组学   蛋白质组学  

摘要： 【目的】探究B型产气荚膜梭菌荚膜多糖合成相关基因与蛋白的表达情况，为后续进一步探究B型产气荚膜梭菌荚膜多糖形成的分子机制提供基础数据。【方法】本研究以添加10%新生牛血清并厌氧培养18h的B型产气荚膜梭菌作为荚膜菌株，以不添加新生牛血清厌氧培养18h的B型产气荚膜梭菌作为对照菌株；分别提取二者的总RNA，反转录为cDNA后进行转录组测序（RNA-Seq），以Padj≤0.05且|log2FoldChange|＞1.0为条件筛选差异表达基因；同时进行蛋白质组学测序，以Padj≤0.05且|log2FoldChange|＞0.585为标准筛选显著差异表达蛋白；两组学数据分别利用ClusterProfilerR软件进行GO功能和KEGG通路富集分析。基于筛选得到的显著差异物，分析转录组与蛋白质组之间的交集特征，并对转录组和蛋白质组的差异交集基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析；选取与荚膜多糖合成相关的基因，采用实时荧光定量PCR验证转录组学测序结果。【结果】与对照菌株相比，荚膜菌株中共鉴定到977个差异表达基因（DEGs）和207种差异表达蛋白（DEPs）。GO功能和KEGG通路富集分析结果显示，DEGs和DEPs主要富集于荚膜多糖生物合成过程、糖基转移酶活性、磷酸中继转导系统、磷酸转移酶系统（PTS 系统）、ABC转运体、甘油磷脂代谢、氨基糖与核苷酸糖代谢、群体感应系统及双组份系统等通路中。联合分析结果显示，当DEGs和DEPs均上调时主要富集于磷酸戊糖途径、脂质分解代谢过程、碳水化合物转运与代谢过程、ABC转运体及群体感应系统等通路；当DEGs和DEPs均下调时主要富集于PTS系统、氨基糖和核苷酸糖代谢、糖酵解/糖异生等通路。实时荧光定量PCR验证结果显示，基因表达趋势与转录组数据中基因表达趋势一致。【结论】B型产气荚膜梭菌在荚膜多糖合成过程中，转录与蛋白水平的调控具有相似性，并涉及多个关键代谢与信号转导通路。本研究结果将为后续进一步探究B型产气荚膜梭菌荚膜多糖形成的分子机制提供基础数据。

关键词： 忍冬叶多糖   樱桃谷鸭   生长曲线   肠道菌群  

摘要： 试验旨在探究纯化忍冬叶多糖（HLP）的结构及其对樱桃谷鸭生长性能及肠道菌群的影响。选取60只1日龄樱桃谷鸭，随机分为4组，每组5个重复，每个重复3只。对照组灌胃生理盐水，低、中、高剂量组分别灌胃0.2、2.0、20.0 g/L HLP溶液，连续灌胃21 d。试验期35 d。采用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy模型拟合生长曲线，结合高通量测序分析盲肠菌群结构。结果显示，纯化HLP相对分子质量为30.77 kDa，主要由半乳糖、葡萄糖组成。35日龄时，与对照组相比，高剂量组樱桃谷鸭增重显著提高（P<0.05）。各剂量组生长曲线模型拟合度整体高于对照组。随着HLP水平升高，拐点日龄明显提前，高剂量组最早为16.66 d,Von Bertalanffy模型对高剂量组拟合效果最优。各组肠道菌群门水平以芽孢杆菌门、拟杆菌门为主。中、高剂量组芽孢杆菌门相对丰度降低、拟杆菌门相对丰度升高，并富集拟杆菌属等有益类群。研究表明，HLP可改善樱桃谷鸭肠道微生态与生长性能，20.0 g/L的应用效果较好。

关键词： 核酸检测   质量指标   无偿献血者   质量体系   无效结果  

摘要： 目的 回顾性分析无偿献血者核酸检测（NAT）结果，评估NAT质量监测指标并探讨无效结果成因，为提升NAT检测质量提供科学依据。方法 收集2023年1月1日至2024年12月31日期间的201186例无偿献血者NAT的资料。计算NAT不合格率、NAT拆分反应率、NAT无效批次率和试剂使用率。同时和国家临床检验中心发布的数据进行比较和分析。结果 2023-2024年NAT不合格率均值为0.06%，各季度差异无统计学意义（P>0.05），且各季度均不高于全国同组试剂平均水平。NAT拆分反应率均值为47.20%，各季度差异无统计学意义（P>0.05），且有4个季度低于全国同组试剂平均水平。NAT无效批次率均值为2.14%，各季度差异无统计学意义（P>0.05），且有6个季度高于全国同组试剂平均水平。NAT试剂使用率均值为144.49%，各季度差异有统计学意义（P<0.05），且有6个季度高于全国同组试剂平均水平。设备故障和对照无效是NAT结果无效的两大主要原因，分别占NAT无效结果总数的46.52%和38.37%。结论 历年NAT质量指标趋势及全国数据对标表明，监测指标可反映核酸检测全过程、预警风险并优化质控体系；设备故障、对照失效造成结果无效，为实验室亟待解决的难题。