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关键词： 中亚白及   多糖   结构表征   斑马鱼   抗氧化活性  

摘要： 系统解析从中亚白及中分离得到的酸性均一多糖USP-U的结构特征,并对其抑制黑色素生成及抗氧化活性进行综合评价。通过部分酸水解、Smith降解、甲基化分析、二维核磁共振技术对USP-U进行结构解析。将45条斑马鱼幼鱼随机分为空白对照组、模型组、USP-U低剂量组(0.1 mg/mL)、USP-U中剂量组(0.3 mg/mL)、USP-U高剂量组(0.5 mg/mL)。采用2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐诱导氧化应激斑马鱼模型,考察USP-U对氧化应激斑马鱼的保护作用。结果表明,USP-U主要由甘露糖(mannose,Man)和葡萄糖(glucose,Glc)组成,推测其可能的重复单位为α-D-Manp-(1→4)-α-D-Glcp-(1→[4)-α-D-Manp-(1]6→4)-α-D-Glcp-(1→6)-α-D-Manp-(1→。抗氧化活性实验结果表明,USP-U对斑马鱼氧化应激模型具有保护作用,可以有效降低活性氧水平和细胞死亡率,还可通过上调过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,降低丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,明显改善斑马鱼氧化损伤的病理情况。综上所述,USP-U可能是一种潜在的抗氧化药物,为中亚白及多糖的开发和应用作为依据,也能够作为天然抗氧化剂的来源。

关键词： 羟自由基   丙二醛   溶酶体   组织蛋白酶   蛋白质降解  

摘要： 该研究以全肌肉匀浆为对象,将匀浆暴露于不同浓度H2O2(0、1、2、4、8、16 mmol/L)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)(0、0.1、0.2、0.4、0.8、1、2 mmol/L)的模拟氧化体系中,通过对肌细胞溶酶体损伤、组织蛋白酶B、L活性、肌浆蛋白和肌原纤维蛋白结构、蛋白质降解指标进行分析,探究羟自由基及MDA诱导溶酶体损伤及其对肌肉蛋白质降解的影响。结果表明,1 mmol/L H2O2和0.2 mmol/L MDA的氧化处理能损伤溶酶体膜,提高组织蛋白酶B、L活性,进一步将肌浆蛋白降解成30~40 kDa左右的肽段,肌原纤维蛋白降解成25~45 kDa左右的肽段。此外,1 mmol/L H2O2氧化处理显著促进非蛋白氮(non protein nitrogen,NPN)、蛋白质降解指数(proteolysis index,PI)的升高(P<0.05)。该研究表明,脂质氧化形成的过氧化物及其终产物均会促进溶酶体的损伤及肌肉蛋白质的降解。

关键词： 胎儿或新生儿溶血   QIAxcel Advanced全自动核酸蛋白分析系统   Diego血型   PCR-SSP  

摘要： 目的 建立基于QIAxcelAdvanced全自动核酸分析系统的高灵敏性及特异性的检测胎儿Diego血型的方法。方法 初步模拟无创产前检测孕妇血浆中不同比例胎儿游离DNA的含量,用QIAxcelAdvanced全自动核酸分析系统检测模拟DNA中Dia抗原基因型序列,验证该方法的准确性和灵敏性。结果 QIAxcelAdvanced全自动核酸分析系统成功检测出不同比例模拟DNA中Dia抗原基因型序列,并且检测到不同比例模拟DNA中男胎的性别决定区Y基因(SRY)基因序列。结论 基于QIAxcel Advanced全自动核酸分析系统可以用于无创产前检测Diego血型系统中DI*A基因型。

关键词： 白刺粗角叶甲   感觉神经元膜蛋白   组织表达谱   唐古特白刺   CD36结构域  

摘要： 【目的】在白刺粗角叶甲(Diorhabda rybakowi)触角转录组测序获得候选感觉神经元膜蛋白(Sensory neuron membrane proteins,SNMPs)的基础上克隆、测序验证该基因,明确DrybSNMPs在成虫不同组织中的表达特点。【方法】通过克隆白刺粗角叶甲DrybSNMP1和DrybSNMP2基因,分析基因序列特性、蛋白结构及构建系统进化树,以及利用荧光实时定量qRT-PCR技术检测DrybSNMPs基因在雌雄成虫不同组织中的表达模式。【结果】本研究从白刺粗角叶甲触角转录组中鉴定和克隆2种SNMPs基因,DrybSNMP1完整开放阅读框长度为1605 bp,编码534个氨基酸,分子量为60.43 kDa;DrybSNMP2长度为1572 bp,编码523个氨基酸,分子量为58.23 kDa。DrybSNMP1和DrybSNMP2均含有CD36结构域,二级结构以α-螺旋为主,且形成3对二硫键支持蛋白质三级结构稳定。系统发育分析表明DrybSNMP1和DrybSNMP2聚类到不同的两个分支,但均与玉米根萤叶甲(Diabrotica virgifera virgifera)的亲缘关系最近。qRT-PCR检测表明,DrybSNMP1在雌、雄成虫触角中特异表达,DrybSNMP2在雌、雄成虫触角中高表达量,在胸部和头部中少量表达。【结论】DrybSNMP1与DrybSNMP2在白刺粗角叶甲雌雄成虫触角中高表达,他们可能在感受挥发性化学信息物质中发挥重要作用,这为深入解析白刺粗角叶甲的求偶和交配的嗅觉通讯机理提供重要依据。

关键词： 宫颈癌   肿瘤干细胞   TJP2基因   YAP1基因   生物信息学分析  

摘要： 目的 探讨紧密连接蛋白2(TJP2)沉默通过YAP1/TAZ-Notch信号通路对人宫颈癌(CC)Hela细胞迁移能力及干细胞特性的影响及作用机制。方法 利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析宫颈癌组织中TJP2的表达水平及相关信号通路,并通过String网站筛选TJP2的互作蛋白;检测不同宫颈癌细胞株中TJP2等基因的表达情况。构建TJP2沉默的Hela细胞模型,采用Transwell实验、划痕实验等检测细胞迁移能力、干细胞特性及相关基因表达水平,同时通过免疫共沉淀实验验证TJP2与YAP1的相互作用。结果 宫颈癌组织中TJP2低表达组与高表达组共筛选出361个差异基因,这些差异基因主要富集于Notch1等信号通路,且TJP2与YAP1存在密切关联。Hela、Siha、C33A细胞中TJP2、SOX2、OCT4的mRNA及蛋白表达水平均高于H8细胞(P<0.05)。TJP2沉默后,Hela细胞迁移能力减弱,SOX2等基因表达水平发生改变,肿瘤球形成率升高,且验证发现TJP2与YAP1存在相互作用。 结论TJP2沉默可抑制宫颈癌细胞的迁移能力及干细胞特性,其机制可能与抑制YAP1/TAZ-Notch1 信号通路有关。

关键词： 鸡   TGF-β1   原核表达   抗体   多克隆抗体  

摘要： 本研究旨在制备鸡转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)的多克隆抗体。首先,以马立克病病毒转化的T淋巴细胞系MSB1细胞的mRNA为模板,通过RT-PCR技术扩增鸡TGF-β1基因的完整CDS区,将其连接至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-TGF-β1;随后,将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21中进行诱导表达,采用亲和层析法对表达蛋白进行纯化;接着,利用免疫家兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测抗体效价,通过Western blot技术和间接免疫荧光检测来评价多克隆抗体的特异性。结果表明,重组原核表达质粒pET-32a-TGF-β1构建成功,经IPTG诱导后获得约65 kDa的重组蛋白;免疫家兔获得TGF-β1抗血清,ELISA检测显示抗体效价达1∶640 000;Western blot结果证实,该抗血清能特异性识别目的蛋白;间接免疫荧光结果显示,该多克隆抗体能很好地识别TGF-β1阳性细胞。综上,本研究制备出的兔抗鸡TGF-β1多克隆抗体,可用于鸡TGF-β1的检测。

关键词： 涡虫   再生   干细胞   增殖   Notch通路基因  

摘要： Notch信号通路是一种保守的细胞间通讯机制,在组织发育与稳态维持中发挥重要作用。为探究其在组织再生及干细胞调控中的作用,本研究选择涡虫为实验材料。鉴定了日本三角涡虫中的Notch信号通路基因aph-1、csl、numb的同源基因,并探讨了它们在涡虫再生过程中的生物学功能。研究结果显示,Djaph-1、Djcsl与Djnumb mRNA在整体涡虫中广泛表达,并在再生涡虫的芽基中富集表达。Djaph-1、Djcsl与Djnumb干扰均导致再生涡虫出现身体中线黑斑和眼点不对称的异常表型以及中枢神经系统再生缺陷,引起了不同再生时间点细胞增殖水平的变化以及眼点、表皮相关基因的表达变化。进一步研究表明,Djaph-1和Djcsl均可正调控Notch信号,而Djnumb则发挥负向调控作用。综上,Djaph-1、Djcsl与Djnumb参与调控干细胞增殖与分化,在涡虫再生过程中发挥关键作用。

关键词： 木薯   bZIP转录因子   MebZIP34   基因克隆   拟南芥   瞬时表达  

摘要： 【目的】解析木薯MebZIP34基因功能,探讨其在抗氧化调控中的作用机制,为木薯采后保鲜与抗逆育种提供理论基础。【方法】以SC8品种木薯块根为材料,克隆MebZIP34编码序列,并开展生物信息学分析,包括蛋白结构、保守结构域、系统进化关系和启动子顺式元件预测。构建植物过表达载体并瞬时转化木薯叶片,检测其对下游抗氧化基因MeMDAR1表达的调控能力;同时获得MebZIP34转基因拟南芥植株,测定其抗氧化相关生理指标。【结果】成功克隆MebZIP34全长CDS序列(975 bp),编码324个氨基酸,含典型的bZIP保守结构域,蛋白以α螺旋和无规则卷曲结构为主。系统进化分析显示其与橡胶树(Hevea brasiliensis)具有较近亲缘关系。启动子分析揭示其受光照、激素及胁迫等多种顺式元件调控。瞬时表达结果表明MebZIP34显著上调MeMDAR1表达,增强SOD活性,降低MDA含量。转基因拟南芥中也观察到相同的表达与生理变化,表明MebZIP34具有调节植物抗氧化能力。MebZIP34 在有序胚性结构(OES)和茎尖分生组织(SAM)中表达水平较高,而在须根、储藏根和茎等营养器官中表现为中等表达水平。【结论】 MebZIP34是一个具有保守结构和功能特征的bZIP转录因子,能通过调控下游基因表达提升植物抗氧化能力,在木薯采后保鲜及木薯贮藏性育种中具有潜在应用价值。

关键词： 姜黄多糖   姜黄素   海藻酸钠   凝胶珠   结构表征   体外消化特性  

摘要： 目的 构建基于海藻酸钠的凝胶珠包埋体系并进行结构表征。方法 采用钙离子交联法制备了海藻酸钠凝胶珠、姜黄多糖-海藻酸钠凝胶珠及纳米颗粒-海藻酸钠凝胶珠,并对其结构、机械性能、流变特性及体外消化释放行为进行系统表征。结果 海藻酸钠、姜黄多糖-海藻酸钠及纳米颗粒-海藻酸钠凝胶珠尺寸分别为1.19、1.24和1.28 mm。扫描电镜仪、红外光谱仪、热重仪及X-射线衍射仪分析表明,纳米颗粒凝胶珠内部相互作用更强,稳定性更高。纳米颗粒凝胶珠硬度、弹性和咀嚼性显著高于海藻酸钠凝胶珠(P<0.05);其胶着性、内聚性和回复性较海藻酸钠凝胶珠提升6.23%、6.28%和4.22%。纳米颗粒凝胶珠在角频率0.1~100.0 rad/s范围的储能模量(G':14521→43390 Pa)与损耗模量(G'':6528.6→8264.1 Pa)均低于海藻酸钠凝胶珠。3种凝胶珠的G'始终大于G''(tanδ<1), 3种凝胶珠以弹性性能为主,其中,纳米颗粒凝胶珠tanδ最低,表现出最优的黏弹结构稳定性。体外模拟释放实验表明,纳米颗粒凝胶珠中姜黄素的释放量由胃阶段的0.32μg增加至肠阶段的5.37μg。结论 本研究成功构建了结构稳定、性能优异的纳米颗粒-海藻酸钠凝胶珠,有效实现姜黄素的肠道靶向递送,为开发基于姜黄多糖和姜黄素的功能性食品凝胶珠提供了理论依据与技术支持。

关键词： 骨质疏松   成骨分化   骨形成   miR-15/16家族   核酸药物  

摘要： 骨质疏松症是一种以骨量减少、骨微结构破坏为特征的全身代谢性骨病,严重危害中老年人的健康。目前临床治疗手段仍存在局限性,因此研究骨质疏松发病机制并开发新的治疗药物具有重要意义。本研究旨在探讨miR-15a-5p、miR-15b-5p和miR-16-5p在成骨分化与骨形成中的调控作用及其分子机制,并评估以其为靶点开发的核酸药物治疗骨质疏松的潜力。在人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells, hMSC)和C57BL/6小鼠骨组织中转染micro RNA mimic和inhibitor后,检测细胞成骨分化和骨形成能力。利用双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-15/16和下游靶基因的靶向关系。化学合成靶向miR-15/16的核酸药物,并验证其对成骨分化、骨形成的调控作用以及对骨质疏松治疗效果。通过类器官技术进一步验证该核酸药物的原位促成骨能力及转化价值。结果显示,miR-15/16显著抑制hMSC成骨分化和C57BL/6小鼠骨形成。miR-15/16通过靶向Wnt3a、Axin2和Lrp6抑制Wnt信号通路活性。而靶向miR-15/16的核酸药物能有效促进hMSC成骨分化,并在去卵巢骨质疏松小鼠模型中展现出显著的治疗效果。类器官实验进一步证明核酸药物可以原位促进成骨并展现出明确的转化应用前景。综上,miR-15/16通过靶向Wnt3a、Axin2和Lrp6抑制Wnt信号通路,从而抑制成骨分化和骨形成,而且靶向 miR-15/16 的核酸药物具有良好的成骨促进作用和骨质疏松治疗潜力,为骨质疏松的机制研究与药物开发提供了新思路。