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关键词： 石斛属   心力衰竭   毛兰素   IκB激酶/核因子κB信号通路   增殖   凋亡  

摘要： 目的探究毛兰素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞活力、增殖、凋亡及IκB激酶/核因子κB(IKK/NF-κB)信号通路的调控作用。方法研究时间为2024年1―3月,体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分组包括对照组(不做干预)、脂多糖组(1 mg/L脂多糖)、实验组(1 mg/L脂多糖+40、80、160 nmol/L毛兰素)、脂多糖+80+抑制剂组(1 mg/L脂多糖+80 nmol/L毛兰素+10μmol/L IKK/NF-κB通路抑制BAY11-7082)、脂多糖+抑制剂组(1 mg/L脂多糖+10μmol/L BAY11-7082)和脂多糖+80+激活剂组(1 mg/L脂多糖+80 nmol/L毛兰素+1μmol/L IKK/NF-κB通路激活剂Prostratin)。干预24 h。分别采用酶联免疫吸附分析、细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst 33258染色法、蛋白质印迹法检测白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞活力、增殖率、凋亡率和IKK/NF-κB通路、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白水平。结果脂多糖组较对照组炎症因子IL-6[(16.33±0.76)ng/L比(5.50±0.87)ng/L]、TNF-α[(17.00±1.00)ng/L比(6.17±0.76)ng/L]表达水平上升(P<0.05),细胞活力下降[(51.33±2.31)%比(100.00±3.00)%,P<0.05];脂多糖+40组、脂多糖+80组和脂多糖+160组较脂多糖组炎症因子IL-6、TNF-α下降(P<0.05),脂多糖+80组和脂多糖+160组细胞活力显著升高(P<0.05)。选择80 nmol/L浓度进行后续实验。脂多糖组细胞增殖率、cyclin D1蛋白水平较对照组下降(P<0.05),细胞凋亡率、caspase-3、磷酸化(p)-IKK和p-NF-κB蛋白水平上升(P<0.05);脂多糖+80组和脂多糖+抑制剂组较脂多糖组显著扭转了上述指标变化(P<0.05);与脂多糖+80组相比,加入IKK/NF-κB通路抑制剂后,上述指标变化更为显著(P<0.05),脂多糖+80+激活剂组则与脂多糖+80+抑制剂组相反(P<0.05)。结论毛兰素或可通过调控IKK/NF-κB通路信号转导促进脂多糖诱导的大鼠心肌H9C2细胞活力、增殖,抑制其凋亡。

关键词： 人羊膜间充质干细胞   放射性损伤   颌下腺上皮细胞   外泌体   α-淀粉酶   水通道蛋白5   低氧预处理  

摘要： 背景:低氧预处理能促进间充质干细胞旁分泌细胞外囊泡、生长因子、抗炎因子及免疫抑制相关因子等,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞来源外泌体有望在组织损伤修复中发挥更好的治疗作用。目的:观察低氧预处理的人羊膜间充质干细胞外泌体对放射性颌下腺上皮细胞损伤的修复作用。方法:将第3代人羊膜间充质干细胞分为低氧及常氧两组,分别给予低氧(体积分数1%O2)及常氧(体积分数20%O2)预处理48 h,然后通过改良超高速离心法从人羊膜间充质干细胞培养上清液中提取常氧和低氧人羊膜间充质干细胞外泌体。将SD新生鼠颌下腺上皮细胞分为空白对照组、放射对照组、常氧加药组、低氧加药组,给予颌下腺上皮细胞5 Gy放射处理,构建放射性损伤颌下腺上皮细胞模型,常氧加药组、低氧加药组在此基础上加入常氧或低氧人羊膜间充质干细胞外泌体与颌下腺上皮细胞共培养3 d。CCK-8法检测各组大鼠颌下腺上皮细胞的增殖活性,ELISA测定各组大鼠颌下腺上皮细胞上清液中α-淀粉酶含量;RT-qPCR检测各组大鼠颌下腺上皮细胞中水通道蛋白5 mRNA表达。结果与结论:①放射对照组的细胞增殖活性较空白对照组明显下降(P<0.05);常氧加药组和低氧加药组第2,3天的细胞增殖活性明显高于放射对照组(P<0.05);低氧加药组第1天的细胞增殖活性高于常氧加药组,第2,3天有升高趋势,但与常氧加药组相比无统计学差异(P>0.05);②放射对照组α-淀粉酶含量较空白对照组显著降低(P<0.05);常氧加药组、低氧加药组α-淀粉酶含量较放射对照组显著升高(P<0.05);与常氧加药组相比,低氧加药组α-淀粉酶含量有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05);③放射对照组水通道蛋白5mRNA表达较空白对照组显著降低(P<0.05);常氧加药组、低氧加药组水通道蛋白5mRNA表达较放射对照组显著升高(P<0.05);低氧加药组水通道蛋白5 mRNA表达较常氧加药组稍升高,但无统计学差异(P>0.05)。结果表明:常氧和低氧预处理的人羊膜间充质干细胞外泌体对放射性颌下腺上皮细胞损伤均有修复作用,但低氧人羊膜间充质干细胞外泌体无明显优势。

关键词： 中华绒螯蟹   新型蛋白源   表观消化率   氨基酸消化率  

摘要： 【目的】为缓解水产饲料中鱼粉资源的短缺,开发高效的鱼粉替代源,本研究旨在系统评估中华绒螯蟹对10种新型蛋白源(涵盖酶解、发酵、膨化及水解工艺)的消化利用特性,并探究深加工原料中粗蛋白与氨基酸消化率之间的一致性特征。【方法】选取酶解鸡肉粉、酶解羽毛粉、酶解全脂大豆、酶解大豆蛋白、发酵棉籽粕、发酵豆粕、膨化大豆、膨化羽毛粉、水解羽毛粉和水解鱼粉共10种新型蛋白原料,以鱼粉为对照,三氧化二钇(Y_(2)O_(3), 0.1%)为外源指示剂,采用“70%基础饲料+30%待测原料”的套算法,测定中华绒螯蟹[初始均重(125.0±6.1) g]对原料干物质、粗蛋白、粗脂肪及氨基酸的表观消化率。【结果】原料种类及加工工艺显著影响营养物质的表观消化率。酶解鸡肉粉(92.80%)和膨化羽毛粉(90.77%)的粗蛋白表观消化率最高,与鱼粉对照组无显著性差异;膨化大豆、水解羽毛粉、酶解全脂大豆和水解鱼粉的粗蛋白消化率相对较低(62.95%~69.22%)。主成分分析及相关性分析揭示,深加工原料的粗蛋白与氨基酸表观消化率之间存在显著不一致性:发酵原料可能受非蛋白氮干扰,其粗蛋白消化率数值被显著高估;而膨化大豆虽粗蛋白消化率较低,但其部分氨基酸(蛋氨酸、组氨酸、赖氨酸、丙氨酸)的表观消化率仍保持在90%以上的高水平。【结论】酶解鸡肉粉和膨化羽毛粉是中华绒螯蟹优质的蛋白源。本研究表明,针对深加工蛋白源,建议结合氨基酸表观消化率修正原料营养价值,以避免配方偏差。

关键词： 拟穴青蟹   类微小核糖核酸病毒   病毒鉴定   宏转录组测序   小RNA分析  

摘要： 【目的】鉴定拟穴青蟹中的潜在RNA病毒,解析其基因组特征、分类地位及其来源的小干扰RNA特征。【方法】以拟穴青蟹外观健康个体为研究对象,采用宏转录组技术筛选候选病毒序列;利用RT-PCR、RACE及Sanger测序获取病毒全长基因组序列;基于生物信息学方法开展开放阅读框预测、保守结构域注释及系统发育分析;进一步通过小RNA测序分析病毒来源的小干扰RNA(vsiRNAs)的长度分布特征。【结果】在拟穴青蟹样品中共鉴定到3种RNA病毒,包括呼肠孤病毒、类整体病毒以及一种新型类微小核糖核酸病毒,命名为拟穴青蟹类微小核糖核酸病毒1(SpPLV1)。该病毒基因组全长9596nt,包含2个开放阅读框,编码RNA解旋酶、RNA依赖的RNA聚合酶及衣壳蛋白等保守结构域。系统发育分析表明,SpPLV1与温州类微小核糖核酸病毒6、7等聚集为独立分支,并与海洋RNA病毒科亲缘关系较近。小RNA分析发现,在拟穴青蟹样品中分别检出125 720条和226 399条可比对至温州蟹病毒5和拟穴青蟹呼肠孤病毒基因组的vsiRNAs,其长度以22nt为主,且正义链与负义链vsiRNA分布均衡;此外,检测到44条可比对至SpPLV1基因组的sRNA序列,且未呈现明显的长度峰值与正负链分布特征。【结论】SpPLV1是在拟穴青蟹中发现的一种新的类微小核糖核酸病毒,其基因组结构具有该类病毒的典型特征,属于与海洋RNA病毒科相近的未分类病毒谱系。研究结果丰富了拟穴青蟹微小核糖核酸病毒的多样性,为进一步开展该病毒的生物学特性及其在宿主生理调控与病害发生中的潜在作用研究提供了理论依据。

关键词： 文蛤   丙氨酸   GWAS   TWAS   WGCNA  

摘要： 【目的】通过多组学手段,系统解析文蛤丙氨酸含量的遗传基础与调控网络,为风味性状分子育种提供理论依据。【方法】以300只2龄文蛤为材料,测定足组织游离氨基酸含量,综合运用全基因组关联分析(GWAS)、表达全基因组关联分析(eGWAS)、全转录组关联分析(TWAS)及加权基因共表达网络分析(WGCNA),从遗传变异、基因表达及共表达网络层面解析文蛤鲜味氨基酸(丙氨酸)含量的遗传基础与多层次调控网络。【结果】GWAS鉴定到4个与丙氨酸含量显著相关的SNP位点,注释获得PRSS48和FUT11两个候选基因,提示蛋白质代谢与糖基化修饰可能影响丙氨酸积累。GWAS与eGWAS共定位发现chr17:23 364 804位点(PP.H4=1.000),可能通过顺式调控影响下游基因表达。TWAS筛选到25个相关基因,功能涉及信号转导、代谢调控等。WGCNA识别出3个显著相关模块(Magenta、Red、Green),富集通路及蛋白质互作网络分析表明,三者分别主导组织水平代谢协调、底物驱动合成代谢及系统层面免疫清除与稳态维持。【结论】本研究从多组学角度揭示了文蛤丙氨酸含量受多基因微效调控和多通路交叉协同,且由合成、支撑与分解模块构成的动态调控网络协同调控,研究结果为文蛤风味性状的分子标记辅助选择与多基因聚合育种提供了重要候选基因资源和理论支持。

关键词： 银耳多糖   镉   金属稳态   肠道菌群   代谢组学  

摘要： 银耳多糖(TFPS)是传统食药同源真菌银耳的主要活性成分。为探究TFPS对Cd诱导肝损伤的解毒作用和机制,本研究将40只雄性ICR小鼠随机分为正常组、Cd暴露模型组、TFPS单独干预组及TFPS联合Cd干预组。通过电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析发现,Cd暴露显著导致肝、肾、脾、肺及心脏中Cd的异常蓄积(P<0.001)。并打破肝脏中Zn、Mn、Cu、Se等必需元素的内稳态。经TFPS干预后,显著降低了各脏器中Cd的含量,同时有效恢复了上述必需元素的稳态水平。进一步结合16S测序(16S核糖体RNA基因测序)结果表明,TFPS能够重塑Cd暴露导致的肠道菌群结构紊乱,表现为潜在的有益菌(如粪杆菌属,Faecalibaculum;阿克曼氏菌属,Akkermansia)的富集,以及有害菌(脱硫弧菌属,Desulfovibrio)的减少,从而缓解Cd导致的重金属损伤。非靶向代谢组学的结果显示,TFPS干预会显著影响组氨酸、谷氨酰胺、脂质及胆汁酸相关的代谢物,并显著调控了肝脏中与氨基酸代谢、脂质代谢及胆汁酸合成等相关的小分子代谢水平。16S和代谢通路富集分析结果表明,TFPS可能通过调节“菌群-代谢-元素稳态”网络来系统地发挥重金属解毒作用。本研究首次从多器官元素分布、肠道菌群结构重塑以及肝脏代谢调节三个层面,系统揭示TFPS对Cd毒性缓解的机制,为开发重金属解毒功能性食品或助剂提供科学依据。

关键词： 血液病   造血干细胞移植   出血性膀胱炎   凝血块   膀胱壁黏膜   血尿  

摘要： 目的:探讨血液病造血干细胞移植术(HSCT)并发出血性膀胱炎(HC)的超声表现特点。方法:回顾性纳入2023年5月—2025年4月北京陆道培血液病医院行HSCT并发HC的52例血液病患者作为研究对象,比较不同类型HC患者的膀胱超声特征及临床表现。结果:52例HSCT患者中,Ⅰ度0%(0/52),Ⅱ度17.30%(9/52),Ⅲ度57.69%(30/52),Ⅳ度25.00%(13/52)。弥漫型HC絮状凝血块发生率高于结节型HC,结节型HC团状凝血块发生率高于弥漫型HC(P<0.05)。早期出血性膀胱炎(EOHC)以膀胱壁弥漫型增厚为主要表现,迟发性出血性膀胱炎(LOHC)则更常见结节型增厚(P<0.05)。黏膜脱落仅在黏膜增强组出现,无黏膜增强组该征象发生率为0。BK病毒(-)组EOHC发生率更高,BK病毒(+)组LOHC发生率更高(P<0.05)。结论:超声检查对HSCT并发HC有较高的分型评估价值,可为移植后并发HC的严重程度评估及治疗监测提供参考依据。

关键词： 铁皮石斛多糖   高糖   视网膜毛细血管周细胞   凋亡  

摘要： 目的:探讨铁皮石斛多糖(DOP)对高糖诱导的视网膜毛细血管周细胞凋亡的保护作用及其线粒体途径相关机制。方法:将大鼠视网膜毛细血管周细胞分为5组:正常组、高糖组、DOP低浓度(DOP-L)组、DOP中浓度(DOP-M)组、DOP高浓度(DOP-H)组。透射电镜观察周细胞的超微结构;AnnexinV-FITC检测周细胞凋亡率;JC-1法检测线粒体跨膜电位表达;qRT-PCR及Western blot检测细胞色素C(Cyt C)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9以及Caspase-3的表达水平。结果:与正常组相比,高糖组细胞线粒体受损,细胞凋亡率、Cyt C、Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著增加(均P<0.01),线粒体跨膜电位、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.01);与高糖组相比,DOP-M组与DOP-H组细胞线粒体受损减少,细胞凋亡率、Cyt C、Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达均显著降低,线粒体跨膜电位、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著增加(均P<0.05)。结论:DOP可抑制高糖诱导的视网膜毛细血管周细胞凋亡,减少线粒体损伤,其机制可能与线粒体跨膜电位改变有关。

关键词： 水稻   剑叶小维管束数   全基因组关联分析   SVN7基因   产量  

摘要： 叶片维管束在光合产物的运输过程中起着重要作用,维管束的数量、大小直接影响着叶片光合产物的运输效率。本研究通过对307份水稻品种的剑叶小维管束数性状进行全基因组关联分析(GWAS),鉴定到一个控制剑叶小维管束数的基因SVN7,该基因与油菜素内酯信号传导的下游信号分子基因OsBZR1等位。利用CRISPR/Cas9敲除技术获得了SVN7基因的突变体。与野生型中花11相比,突变体的剑叶小维管束数显著增加,表明SVN7基因负调控剑叶小维管束数。除此以外,snv7突变体的穗颈大、小维管束数、剑叶宽度和穗粒数均显著增加,而株高和粒重显著降低,说明SVN7基因具有一因多效性,同时调控源、库、流相关性状。挖掘到了SVN7基因的优异单倍型Hap1,该单倍型具有较多的剑叶小维管束数、较宽的剑叶、较多的穗粒数和较高的单株产量,可用于分子设计育种培育高产的水稻新品种。

关键词： 人牙髓干细胞   碱性成纤维细胞生长因子   细胞增殖   复合性生物支架   成血管   组织工程  

摘要： 背景:前期研究证明,一定比例的甲基丙烯酸酐改性明胶(gelatin-methacryloyl,GelMA)与经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)复合生物支架具有良好的生物学性能,有利于细胞的增殖与黏附。负载碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的复合性生物支架为牙髓再血管化提供了新思路。目的:观察负载bFGF的GelMA/TDM复合生物支架对人牙髓干细胞增殖、迁移及成血管性能的影响。方法:制备负载0,50,100,200,500 ng/mL bFGF的GelMA/TDM复合支架,通过CCK-8检测牙髓干细胞增殖能力并筛选bFGF的最佳质量浓度,然后将牙髓干细胞分3组处理,分别为GelMA/TDM组、bFGF-GelMA/TDM组、空白对照组。划痕实验检测牙髓干细胞的迁移能力,Matrigel小管形成实验检测牙髓干细胞成管分支点数量,免疫荧光染色检测牙髓干细胞中血管内皮生长因子蛋白的表达,qPCR检测牙髓干细胞中成血管相关基因(血管内皮生长因子、转化生长因子β、肝配蛋白B2)的表达。结果与结论:①CCK-8检测结果显示培养3,5 d时,负载bFGF的GelMA/TDM复合支架均可促进牙髓干细胞的增殖,其中bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架的促增殖作用最明显;②细胞划痕实验显示bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组细胞迁移面积明显大于GelMA/TDM组和空白对照组;③Matrigel小管形成实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组成管分支点数量大于GelMA/TDM组和空白对照组;④免疫荧光实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组血管内皮生长因子阳性平均吸光度值高于GelMA/TDM组和空白对照组;⑤qPCR实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组成血管相关基因血管内皮生长因子、转化生长因子β、肝配蛋白B2的表达高于GelMA/TDM组和空白对照组。结果表明,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架表现出较好的促牙髓干细胞增殖、迁移和成血管分化能力。