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关键词： 胡萝卜   SOC1   启动子   光照   激素  

摘要： 以6种不同的胡萝卜品种为材料,采用烟草瞬时表达系统和活体成像技术检测启动子活性的方法,研究了在光照、黑暗、不同浓度的激素GA和ABA处理下的启动子活性,以期探究胡萝卜SOC1基因启动子的调控机制,解析胡萝卜开花分子机制。结果表明:光照和ABA均可诱导各启动子的活性,经36 h光照处理后,启动子活性显著上升,上升倍数可达约6.52倍至12.06倍;经ABA处理后,启动子活性也均有显著上升,分别上升了约1.66倍至5.60倍。而部分基因型启动子经GA处理后被显著抑制,其活性分别下降了约1.44倍和2.40倍。由此表明,光照和ABA可诱导DcSOC1-2启动子的表达,而部分基因型DcSOC1-2启动子会被GA负向调控。

关键词： 公石松   花药   花粉块   多糖   脂滴  

摘要： 许多兰科植物的花粉聚集成花粉块。为了探索花粉块的发育特征,本研究选取公石松(Ludisia discolor)不同时期的花粉块,采用半薄切片技术和植物组织化学染色方法,对其花粉块发育的结构和营养物质代谢规律进行探索。结果表明:(1)公石松花药壁由表皮、药室内壁、中层、绒毡层各一层细胞组成,其中绒毡层和中层细胞中途退化。在小孢子母细胞时期,花粉块外形成胼胝质壁,但花粉块内部的花粉之间没有形成胼胝质壁结构。减数分裂为同时型,减数分裂Ⅱ后才形成细胞壁分割4个小孢子。在小孢子发育早期,花粉块外出现孢粉素并形成花粉外壁,但花粉块内部的花粉粒之间没有孢粉素积累,也不形成花粉外壁。在小孢子晚期,药壁的中层和绒毡层降解。(2)小孢子母细胞时期,小孢子母细胞和绒毡层细胞均有少量脂滴积累。在小孢子发育晚期,花粉粒细胞中出现淀粉粒。开花时,成熟花粉中淀粉粒体积增大且数量增多。成熟花粉含一个营养细胞和一个生殖细胞,为二胞淀粉型花粉。

关键词： 振荡提取法   提取工艺   多糖   正交实验  

摘要： 针对超声提取法设备成本与维护费用较高、规模化生产适用性有限等缺点,本文开发了一种替代的、节能的、基于振荡的榴莲壳多糖提取方法。该方法使用蒸馏水作为溶剂、榴莲壳作为原料,通过单因素实验与正交实验相结合的方法,系统研究了振荡温度、振荡时间及料液比对榴莲壳多糖得率的影响。实验结果表明:振荡法提取榴莲壳多糖的最佳工艺为振荡温度60℃,振荡时间40min,料液比为1∶20,该条件下榴莲壳多糖的得率为2.68%。相较于超声波提取榴莲壳多糖的方法,振荡提取法具有设备简单,操作简便且更适合工业化放大的优点。

关键词： 响应面法   粗毛纤孔菌   子实体多糖   提取工艺   抗炎  

摘要： 目的 优化粗毛纤孔菌子实体多糖(IHP)提取工艺,并评价其对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的抗炎作用。方法 采用超声辅助酶解法提取粗毛纤孔菌子实体多糖。首先,在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman实验设计,筛选出对多糖得率影响较为显著的四个因素:纤维素酶增添量、料液比、酶解时间和超声时间。随后以多糖得率为响应值,采用BoxBehnken实验设计及响应面分析法优化提取条件,得到最佳工艺参数。最后采用3.5%的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导BALB/c雄性小鼠建立UC模型,设置正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶阳性组[400 mg/(kg·d)]及多糖高、低剂量组[400、100 mg/(kg·d)]。通过疾病活动指数(DAI)、体重变化、结肠形态学、组织病理学及酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,结合16S核糖体RNA(16S rRNA)基因测序分析肠道菌群组成变化。结果 最佳工艺参数为:纤维素酶增添量0.634%、料液比1∶18.076(g/mL)、酶解时间1.330 h、超声时间21.038min,预测多糖提取率为14.32%。与模型组比较,多糖高、低剂量组均显著缓解UC小鼠的疾病活动指数上升、结肠缩短及病理损伤;并降低了炎症因子水平。给药组还显著调节了UC小鼠诱导的肠道菌群紊乱,上调厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、另枝菌属(Alistipes)、拟杆菌属(Bacteroides)等有益菌相对丰度,下调变形菌门(Proteobacteria)、气味杆菌属(Odoribacter)和毛螺菌科(Lachnospiraceae)等有害菌的相对丰度。结论 响应面优化的粗毛纤孔菌子实体多糖提取工艺稳定可靠,多糖对DSS诱导的UC小鼠模型具有显著的治疗效果,其机制可能与抑制炎症反应和调节肠道菌群平衡有关。

关键词： 结核分枝杆菌(Mtb)   结核病(TB)   潜伏性结核感染(LTBI)   休眠菌   间充质干细胞(MSC)  

摘要： 结核分枝杆菌(Mtb)感染后可在体内形成代谢和繁殖低下或停止的休眠菌,引起无症状的结核潜伏感染(LTBI)。在特定条件下,Mtb休眠菌可复苏生长,并引起临床感染症状,成为活动性结核病(TB)的主要来源。Mtb休眠菌对药物不敏感,现有TB疫苗也无法阻止休眠菌的形成和复苏,因此成为TB防治的主要障碍之一。Mtb休眠菌的形成需要独特的微环境,包括低氧、营养缺乏和免疫抑制等多种因素。Mtb作为胞内寄生菌,主要感染巨噬细胞。新近研究发现,Mtb可感染间充质干细胞(MSC),并以休眠菌形式在胞内长期存活。MSC具有缺氧、静息状态、脂滴形成和高自噬水平的微环境,MSC还可抑制宿主抗Mtb感染免疫应答,导致Mtb在体内形成休眠菌并长期存活,是TB复发的重要原因。本文对Mtb感染MSC并形成休眠菌的研究进展进行综述。

关键词： 芥菜   WRKY   基因克隆   生物信息学分析   表达分析   花青素  

摘要： 为明确转录因子WRKY44对芥菜花青素积累的影响,本研究以紫薹-绿薹芥菜近等位基因系为材料,从芥菜中获得1个WRKY转录因子成员BjWRKY44,对其编码蛋白进行生物信息学分析,同时分析该基因在不同颜色芥菜中的表达特性及其与花青素含量间的相关性。结果表明,芥菜BjWRKY44的基因组和cDNA序列分别为1 516、1 266 bp,编码421个氨基酸。BjWRKY44蛋白具有WRKY保守结构域,定位于细胞核,与拟南芥、甘蓝型油菜等植物WRKY44聚类在同一个分支,亲缘关系近。qRT-PCR结果表明,BjWRKY44基因在紫色芥菜中的表达水平显著高于绿色芥菜的,其表达水平与花青素含量呈显著正相关。蛋白互作网络结果表明,BjWRKY44可与花青素合成、转运关键基因、MBW复合体等蛋白存在互作。综上,BjWRKY44可能参与调控芥菜花青素积累。本文可为后续研究WRKY在芥菜花青素积累过程中的功能和机制提供一定的理论支撑。

关键词： 精氨酸   代谢途径   间充质干细胞   分化   成软骨  

摘要： 精氨酸是一种功能性氨基酸,在畜牧业生产中有广泛应用。精氨酸通过参与机体多种重要的生理途径,如细胞增殖与分化、信号转导、蛋白质合成等方式,发挥其提高动物的生长、发育与生产性能的作用。本文综述了精氨酸及其代谢产物的生理作用、代谢途径及其在间充质干细胞分化中的作用机制,以期为通过营养策略提高畜禽生产性能提供理论依据。

关键词： 三七主根   应答“拔鸡腿   多糖含量   多糖合成相关基因   相关性分析  

摘要： 【目的】挖掘三七主根中多糖合成相关且应答“拔鸡腿”的基因,为“拔鸡腿”表征三七主根高多糖含量分子机理的研究及其良种选育奠定基础。【方法】以二年生、三年生三七“非拔鸡腿”和“拔鸡腿”植株主根为材料,用3,5-二硝基水杨酸法和硫酸-蒽酮法分别测定多糖和可溶性糖含量,基于转录组测序和实时荧光定量PCR及Pearson相关性分析挖掘主根中多糖合成相关且应答“拔鸡腿”的结构基因和转录因子基因。【结果】二年生、三年生三七“拔鸡腿”植株主根的多糖含量分别为33.04 mg/g和55.53 mg/g,分别较“非拔鸡腿”植株极显著提高75.37%和92.82%;可溶性糖含量分别为204.59 mg/g和210.30 mg/g,分别较“非拔鸡腿”植株极显著提高14.08%和显著提高22.19%。“拔鸡腿”植株主根的多糖与尿苷二磷酸-D-葡萄糖醛酸-4-差向异构酶基因1(GAE1)、葡萄糖-6-磷酸异构酶基因2(GPI2)、蔗糖合酶基因1(SUS1)、磷酸葡萄糖变位酶基因2(PGM2)和磷酸葡萄糖变位酶基因1(PGM1)转录水平的相关系数相对较高,分别为0.500、0.314、0.293、0.172和0.044,与AP2/乙烯响应因子1(AP2/ERF-1)和AP2/乙烯响应因子2(AP2/ERF-2)转录水平的相关系数分别为0.063和-0.014。【结论】三七主根“拔鸡腿”的多糖含量较“非拔鸡腿”极显著增高,主根中多糖合成相关且应答“拔鸡腿”的结构基因主要为SUS1、SUS2、PGM1、PGM2、GPI2和GAE1;转录因子基因主要为AP2/ERF-1和AP2/ERF-2。

关键词： 驼背鲈   CD4-1   单克隆抗体   原核表达   重组蛋白  

摘要： CD4-1分子是硬骨鱼类T淋巴细胞表面的关键膜蛋白,在适应性免疫应答中具有重要调控功能。当前,针对多数鱼类CD4-1分子的高特异性单克隆抗体十分缺乏,严重制约了鱼类T细胞免疫功能的深入研究及相关适应性免疫机制的解析。为制备驼背鲈(Cromileptes altivelis)CD4-1(Ca CD4-1)的单克隆抗体,本研究构建了Ca CD4-1原核表达载体,诱导表达并纯化获得重组蛋白r Ca CD4-1。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合与筛选,成功获得7株能够稳定分泌抗Ca CD4-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株(6H3、6A2、6B2、6E1、6A4、6A5、6H2)。经ELISA鉴定,7株细胞株分泌的抗体均为IgG型,其中6E1属IgG2a亚型,其余为IgG1亚型。进一步对6H3株进行腹水制备并纯化抗体,ELISA测定腹水抗体的效价高于1:1 088 000。Western blot分析显示,该抗体能特异性识别r Ca CD4-1,而不与r Ca CD4-2发生交叉反应。流式细胞术检验该抗体识别天然抗原的反应性,结果显示,该抗体能特异性识别驼背鲈头肾淋巴细胞,其中CD4-1+T细胞数量为12.3%,结果表明,本研究所制备的单克隆抗体具有高亲和力与良好特异性,为后续开展驼背鲈CD4-1分子的功能及其适应性免疫机制的研究提供良好的工具。

关键词： 星星草   PtCASP1   基因克隆   亚细胞定位   表达分析   盐涝复合胁迫  

摘要： 星星草(Puccinelliatenuiflora)是一种对盐涝交互逆境有独特适应性的盐生植物,内皮层加厚形成的质外体屏障可能是其适应这一环境的关键。凯氏带和木栓层是根内皮层重要的水和溶质径向运输的质外体屏障。本研究以星星草为材料,通过基因克隆获得凯氏带形成关键基因 PtCASP1,并对该基因进行生物信息学分析、亚细胞定位及盐、涝和盐涝复合胁迫下的表达模式分析。结果表明,PtCASP1基因全长552bp,编码184个氨基酸,为疏水性稳定蛋白,具有响应赤霉素、干旱、低温及光反应等顺式作用元件。系统进化分析表明 PtCASP1 与多花黑麦草(Lolium multiflorum)、看麦娘(Alopecurus aequalis)的亲缘关系较近。免疫荧光分析显示,PtCASP1 蛋白分布于细胞核与细胞膜。PtCASP1 基因在根中表达量显著高于叶,且受盐、涝及盐涝复合胁迫诱导,均在各处理 72 h 时表达量最高。本研究可为今后深入研究凯氏带在星星草适应盐涝交互逆境中的功能提供参考。