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关键词： 白细胞介素6   人根尖牙乳头干细胞   成骨分化   酪氨酸激酶2/信号转导与转录激活因子3信号通路   根尖周病  

摘要： 目的探讨低浓度白细胞介素-6(IL-6)对人根尖牙乳头干细胞(hSCAPs)增殖、迁移与成骨分化的影响及其作用机制。方法从郑州大学第一附属医院口腔颌面外科拔除的第三恒磨牙根尖牙乳头内提取hSCAPs, 使用流式细胞术及免疫荧光术进行鉴定;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及Transwell迁移实验检测不同质量浓度IL-6(10、20、50 μg/L, 以0 μg/L IL-6为对照组)对hSCAPs增殖活性和迁移能力的影响;采用茜素红染色、氯化十六烷基吡啶定量检测、碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP活性测定检测不同质量浓度IL-6炎症状态下 hSCAPs 的成骨分化能力, 确定最适宜的IL-6浓度模拟hSCAPs成骨分化的炎症环境;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法等方法检测低浓度(10 μg/L)IL-6炎症状态下 hSCAPs的成骨分化能力;采用蛋白质印迹法、Transwell迁移实验、ALP染色及ALP活性测定、RT-qPCR实验探究低浓度IL-6炎症状态下hSCAPs通过酪氨酸激酶2-信号转导与转录激活因子3(JAK2-STAT3)信号轴促进迁移和成骨分化的机制。结果分离培养的hSCAPs表面标志物CD24、波形蛋白表达呈阳性, CD45、角蛋白表达呈阴性。不同质量浓度IL-6对hSCAPs的增殖能力均无显著影响(均P>0.05);10 μg/L IL-6炎症状态下 hSCAPs的细胞迁移数量[(11 463.33±622.70)个]、氯化十六烷基吡啶定量结果(2.087±0.121)及ALP活性[(94.11±4.06)U/g]均显著高于对照组[分别为(8 246.00±674.02)个、1.330±0.096、(53.87±3.70)U/g](均P<0.05), 且10 μg/L IL-6组细胞迁移数量、ALP活性与20 μg/L IL-6组[分别为(9 503.33±275.03)个、(74.44±3.55)U/g]相比增加更为显著(均P<0.01)。在低浓度IL-6炎症状态下hSCAPs成骨矿化诱导后, 成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)、Runt相关转录因子2(Runx2)的基因表达水平在3 d[分别为(2.033±0.308)、(1.433±0.215)]、7 d[分别为(3.497±0.153)、(3.360±0.061)]时均显著高于对照组(均P<0.05), 7 d时OCN基因表达水平(2.950±0.315)显著高于对照组(均P<0.05);在3、7 d时骨钙素(OCN)的蛋白表达水平[分别为(2.077±0.447)、(5.023±0.537)]均显著高于对照组(均P<0.05), 7 d时OSX、Runx2的蛋白表达水平[分别为(3.283±0.601)、(3.740±0.613)]均显著高于对照组(均P<0.05)。低浓度IL-6炎症状态下, 与对照组相比, hSCAPs的p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平、细胞迁移量和ALP活性均显著增加, OCN、OSX、Runx2基因和蛋白表达水平亦显著增加, JAK2-STAT3通道阻断剂AG490能显著逆转这种迁移和成骨分化的促进作用(均P<0.05)。结论不同浓度IL-6对hSCAPs的增殖无显著影响, 低浓度IL-6炎症状态下hSCAPs通过JAK2/STAT3通路促进细胞迁移和成骨分化。

关键词： 紫外-可见分光光度法   b型流感嗜血杆菌结合疫苗   多糖含量   不确定度   评估  

摘要： 目的:对紫外-可见分光光度法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗中多糖含量的不确定度进行评定分析。方法:依据现行版《中华人民共和国药典》通则3421对b型流感嗜血杆菌结合疫苗中多糖含量进行测定。根据《测量不确定度评定与表示》《化学分析中不确定度的评估指南》及实验过程，分析测量过程的各个不确定度来源，计算其大小并合成。结果:多糖含量的不确定度来源主要有标准溶液配制u（P）、试样处理u（S）、标准曲线拟合u（C）、测量重复性u（rep）、紫外分光光度计u（I）及方法偏倚u（B）;合成标准不确定度uc为1.109 0μg·mL-1，扩展不确定度U为2.218 0μg·mL-1（k=2，置信概率为95%）。结论:测定结果的不确定度主要来自标准曲线拟合、试样处理和方法偏倚。控制标准曲线拟合降低不确定度分量，效果最为明显;试样处理引入的不确定度主要来源于移液器操作，需计量检定，试样处理1 mL及以上样品时用移液管，1 mL以下用移液器配制标准曲线效率高;方法偏倚引入的不确定度需严格依照标准检验，把控好实验细节;控制实验环境温度，对仪器定期检定与维护;本研究可为基于紫外-分光光度法的药品质量控制的不确定度评估提供参考。

关键词： 前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体   药品遴选   依洛尤单抗   阿利西尤单抗   托莱西单抗   伊努西单抗   昂戈瑞西单抗   瑞卡西单抗  

摘要： 目的:基于多维度评估方法，对前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin 9,PCSK9)单克隆抗体进行全面分析，为临床用药选择及医疗机构药物遴选提供参考依据。方法:参考《中国医疗机构药品评价与遴选快速指南(第二版)》评价体系，对部分评分细则进行适当调整，从药学特性、有效性、安全性、经济性及其他属性5个方面，对国内已上市的6种PCSK9单克隆抗体进行量化评估，并根据得分结果确定推荐等级。结果:量化评分结果从高到低排序分别为依洛尤单抗(79.31分)、阿利西尤单抗(74.85分)、托莱西单抗(73.86分)、瑞卡西单抗(71.95分)、昂戈瑞西单抗(70.9分)、伊努西单抗(70.88分)。结论:6种PCSK9单克隆抗体均表现出良好的降脂疗效，均为强推荐。

关键词： 有机物检测   实验改进   定性判断   双缩脲—分光光度法   定量分析核心  

摘要： 人教版高中生物学必修1中“检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质”实验存在操作复杂、缺乏对照、缺乏定量分析等不足。现通过改进试剂和器具,增加标准品对照实验,增加双缩脲—分光光度法测定蛋白质含量实验,有效简化实验操作,提升实验说服力,促进学生科学探究素养的发展。

关键词： 牛膝多糖   牙周炎   成骨   破骨  

摘要： 目的 探索牛膝多糖治疗大鼠牙周炎的有效性，并进一步探索其可能的机制。方法 雌性Wistar大鼠30只，随机分为三组，正常对照组（n=5，正常饮水），牙周炎组（n=15，结扎左上第二磨牙+高糖饮水），牛膝多糖组（n=10，结扎左上第二磨牙，牛膝多糖灌胃+高糖饮水）。实验动物给予牛膝多糖饮水30天，收集大鼠上颌骨，进行Micro CT扫描，并计算牙槽骨丧失程度。通过Trap染色，观察牙槽骨破骨、成骨平衡。通过检测牙齿周围组织内炎症因子水平，明确牛膝多糖抗炎能力。结果 牛膝多糖能够显著减轻牙周炎导致的大鼠上颌第二磨牙牙槽骨高度的吸收程度，牛膝多糖组骨体积分数、骨小梁厚度及骨小梁分离度的变化优于牙周炎组，同时牛膝多糖可减少牙周支持组织内TRAP阳性染色细胞数量，上调OPG染色，降低IL-6、TNF-α炎症因子水平。结论 牛膝多糖通过降低牙周支持组织内炎症水平，维持大鼠牙槽骨内成骨破骨平衡，减轻牙周炎程度。

关键词： 干细胞转化   信号通路   胃肿瘤   胃癌前病变   肠上皮化生  

摘要： 胃肠上皮化生(GIM)是胃癌癌前病变, 与胃癌发生密切相关。因此, 了解GIM发生及癌变的具体机制对胃癌的早期诊断、防治, 以及改善胃癌患者预后至关重要。近年来, 越来越多的证据表明GIM和癌变起源于干细胞的异常转化。现就影响GIM和胃癌发生的相关干细胞以及调控干细胞异常转化的信号通路机制的研究进展进行综述, 为胃癌的预防和靶向治疗策略提供参考。

关键词： 枸杞子粗多糖   超声波   提取率   抗氧化   细胞实验  

摘要： 该文以提取液中枸杞子粗多糖含量为指标，采用单因素试验考察超声时间、超声温度、超声功率等对提取液粗多糖含量的影响，在此基础上，通过响应曲面法优化枸杞子粗多糖的提取条件。结果表明，最佳的提取工艺为超声时间57.3 min、超声温度86.5℃、超声功率164 W，在此条件下，提取液粗多糖的含量为（0.631 6±0.002 6）mg/mL。利用吸附、沉淀分离等方法去除提取液中的色素、黄酮等成分，进一步获得了粗多糖纯化样品，浓度为2.5 mg/mL的粗多糖样品对DPPH自由基清除能力达到80%以上。细胞实验结果表明，随着枸杞子粗多糖浓度的增加，肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞的存活率逐渐降低，当枸杞子粗多糖的浓度达到140μg/mL时，存活率仅为44.4%，证明枸杞子粗多糖有抑制HCC细胞存活的能力。通过划痕实验证明，枸杞子粗多糖提取液对于HCC细胞具有良好的抑制转移能力。

关键词： 茶多酚   黄芪多糖   断奶仔猪   生长性能   肠道形态   抗氧化   免疫指标  

摘要： 试验旨在研究茶多酚和黄芪多糖配伍对断奶仔猪生长性能、腹泻率、肠道发育、抗氧化及免疫指标的影响。选取100只体重为（6.50±1.25） kg的28日龄“长×大”二元杂交头胎断奶仔猪，随机分为4组，每组5个重复，每个重复5只仔猪。对照组饲喂不含抗生素的基础饲粮；TP组饲喂基础饲粮+400 mg/kg茶多酚（TP）;APS组饲喂基础饲粮+200 mg/kg黄芪多糖（APS）;TP-APS组饲喂基础饲粮+200 mg/kg茶多酚+100 mg/kg黄芪多糖（TP-APS），预试期3 d，正试期28 d。结果表明：TP、APS、TPAPS组末重、平均日增重显著高于对照组（P<0.05）；料重比、腹泻率均显著低于对照组（P<0.05）。TPAPS组十二指肠绒毛高度及绒隐比显著高于对照组（P<0.05）。TP、APS、TP-APS组空肠肠道黏膜跨膜电阻（TER）值显著高于对照组（P<0.05）；二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-Lac）含量及髓过氧化物酶（MPO）活性、FITC标记葡聚糖（FD4）通透性显著低于对照组（P<0.05）。与对照组相比，TP、APS、TPAPS组断奶仔猪血清中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著提高（P<0.05），丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05）。TP、APS、TP-APS组中断奶仔猪血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-4（IL-4）含量均显著高于对照组（P<0.05）;TP-APS组白细胞介素-6（IL-6）含量显著低于对照组（P<0.05）。由此可见，断奶仔猪饲粮中添加200 mg/kg TP+100 mg/kg APS能促进仔猪生长、提高抗氧化力及免疫力、降低腹泻率并能改善肠道黏膜形态。

关键词： 肉桂   萜类合酶基因   克隆   生物信息学分析   表达特征  

摘要： 【目的】克隆肉桂萜类合酶基因CcTPS26，解析其序列特征、保守结构、系统进化及时空表达模式；通过原核表达获得重组蛋白，为阐明肉桂萜类生物合成分子机制、开展酶学功能验证奠定研究基础。【方法】以肉桂（Cinnamomum cassia Presl）为材料，克隆CcTPS26基因全长序列；利用生物信息学工具分析编码蛋白理化性质、保守结构域、亚细胞定位、启动子顺式元件及系统进化关系；通过分子对接模拟CcTPS26蛋白与底物FPP、GPP的相互作用及结合稳定性；构建原核表达载体，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导蛋白表达，采用SDS-PAGE检测重组蛋白分子量与可溶性，通过Ni2+亲和层析纯化目的蛋白；利用qRT-PCR技术检测CcTPS26 在肉桂不同组织、不同发育时期韧皮部的表达变化。【结果】成功克隆肉桂CcTPS26 基因，开放阅读框（ORF）全长为1 686 bp，编码561个氨基酸；编码蛋白理论分子量 64.94 kDa，等电点5.60，属于亲水性酸性不稳定蛋白，无信号肽与跨膜结构，亚细胞定位于细胞质。该蛋白含有植物萜环化酶保守结构域 Terpene cyclase plant C1，同时具备 DDXXD、NSE/DTE 等 I 类萜类合酶特征基序；系统进化分析表明，CcTPS26与阴香（Cinnamomum burmanni）TPS蛋白亲缘关系最近（93.76%）；基因启动子区包含大量胁迫应答与激素调控元件，提示该基因的转录过程可能受逆境与激素信号调控；分子对接结果显示，CcTPS26可稳定结合 GPP、FPP，依靠氨基酸残基间氢键与盐桥作用维系底物构象。SDS-PAGE检测结果显示，经原核表达与Ni2+亲和层析纯化的CcTPS26重组蛋白分子量约82.1 kDa，菌体上清可检测到目的条带，证明该蛋白以可溶性形式表达；梯度咪唑洗脱试验显示，275 mmol/L咪唑洗脱组分杂蛋白最少，目的蛋白纯化效果最优。qRT-PCR定量结果表明，CcTPS26表达存在显著组织与发育时期特异性；该基因在果实、叶片、茎韧皮部表达量显著高于花和茎木质部；5年树龄肉桂茎韧皮部中CcTPS26表达水平达到峰值。【结论】首次从肉桂中克隆获得萜类合酶基因CcTPS26，其编码蛋白可特异性识别萜类合成前体底物，明确了其序列特征、时空表达模式及重组蛋白纯化最佳条件。该基因在萜类合成关键组织中优势表达，推测其在肉桂萜类成分生物合成过程中发挥着重要催化作用，可为肉桂萜类代谢调控及分子育种提供关键候选基因。

关键词： 高体鰤   蛋白质   脂类   营养需求   饲料  

摘要： 高体鰤（Seriola dumerili）作为一种重要的海水养殖鱼类，近年来在我国发展迅猛，年产量已达到2000 t。该鱼种因其生长快速、肉质优良和营养价值高等特点备受市场青睐。目前，对高体鰤的营养需求和饲料研究虽有一定成果，但仍存在部分营养素研究的空白。文章综述了高体鰤对主要营养素（包括蛋白质、氨基酸、脂类、脂肪酸、碳水化合物及微量营养素）的需求特征，同时对其配合饲料中蛋白源与脂肪源的替代以及功能性饲料添加剂的应用现状进行了总结。通过梳理相关研究进展，旨在为高体鰤配合饲料的研发提供参考。