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关键词： 白藜芦醇   脂肪间充质干细胞   肝纤维化   自噬   小鼠  

摘要： 目的 探讨白藜芦醇(Res)预处理脂肪间充质干细胞(ADSCs)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用。方法 将50只小鼠随机分为对照组、CCl4模型组、ADSCs治疗组、Res预处理的ADSCs治疗组以及Res预处理的ADSCs+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)治疗组。通过CCl4腹腔注射构建小鼠肝纤维化模型。各治疗组分别给予相应的药物治疗,CCl4组和对照组小鼠给予等量的磷酸盐缓冲溶液(PBS)。全自动血清生化仪检测血清中肝功能相关指标的表达;苏木精-伊红染色(HE)染色观察肝脏组织病理变化;马松染色(Masson)和天狼星红染色检测胶原纤维含量,免疫荧光检测肝纤维化标志物转化生长因子-β(TGF-β)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、羟脯氨酸(HYP)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝组织中I型胶原蛋白(collagen I)的含量;免疫印迹法检测肝脏自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1和p62的表达水平。结果 CCl4诱导肝纤维化模型中,小鼠肝脏系数、肝脏结构功能明显受损,自噬被抑制;胶原纤维沉积明显增多,肝纤维化的相关标志物TGF-β、α-SMA、collagen I、HYP、MMP-2、MMP-9的表达也明显升高。经过ADSCs以及Res预处理的ADSCs治疗后小鼠肝脏结构和功能出现不同程度的恢复,自噬相关蛋白表达增加,纤维化也明显被改善,Res预处理组效果更明显。加入3-MA后,Res预处理的ADSCs治疗组自噬相关蛋白表达被抑制,同时对肝纤维化的治疗效果也被减弱。结论 Res预处理的ADSCs可能通过调节细胞自噬,改善肝纤维化的发展。

关键词： 水稻畸形颖壳   籽粒形态   花粉活性   图位克隆   食味品质   DUF640家族  

摘要： 【目的】水稻颖壳发育直接影响籽粒形态、授粉效率、产量与品质。本研究通过鉴定水稻颖壳发育相关突变体,对突变性状基因进行定位克隆,阐明目标基因调控颖壳发育的分子调控机理,可为水稻分子育种提供理论参考。【方法】利用EMS诱变粳稻品种SN9816获得agl1突变体。通过石蜡切片、扫描电镜观察颖壳及花器官形态结构,碘-碘化钾染色法测定花粉活力。利用图位克隆技术对AGL1进行定位,对候选基因测序,同时分析目标基因的保守性和多样性。采用Foss谷物分析仪测定糙米品质参数。【结果】与野生型SN9816相比,突变体agl1的外稃弯曲程度更大,纵向长度没有变化,内稃向内凹陷,内、外稃宽度明显缩小,外稃极大程度的包裹住内稃。突变体agl1的浆片形态异常,雌蕊增大,雄蕊排列紊乱;通过测定花粉活性发现,agl1的花粉活性降低,导致结实率下降。利用图位克隆的方法将AGL1定位在第2染色体标记Indel4与Indel5之间,物理距离为68.7 kb。对区间内的7个ORF (open reading frames)测序,发现LOC_Os02g5661在突变体中发生一个单碱基突变,该基因编码一个DUF640结构域蛋白。DUF640家族在水稻中具有保守的ALOG结构域和多样的表达调控元件,其突变可能不仅调控花器官形态建成,在稻米品质中还具有重要作用。米质测定结果表明,糙米蛋白质与游离脂肪酸含量升高,直链淀粉与总淀粉含量降低,导致食味品质下降。【结论】AGL1 基因是调控水稻颖壳发育和米质的关键因子,其功能缺失影响了稃壳形态建成,降低花粉活力,并可能干扰了籽粒灌浆过程,导致产量与品质协同劣变。

关键词： 噬菌体   裂解酶   基因表达   副溶血性弧菌   蜡样芽孢杆菌  

摘要： 抗生素耐药食源性致病菌威胁公共卫生,亟需开发新型抗菌策略。本研究基于14株新型烈性噬菌体(10株革兰氏阴性菌噬菌体,4株革兰氏阳性菌噬菌体)挖掘15个裂解酶基因并对其进行序列分析,通过大肠杆菌BL21(DE3)异源表达系统,最终获得副溶血性弧菌噬菌体裂解酶LysCA8和LysBA3的纯化蛋白,以及蜡样芽孢杆菌噬菌体裂解酶LysLY1和LysLY3的粗酶蛋白。其中,裂解酶LysLY1和LysLY3可高效广谱裂解供试的全部89株蜡样芽孢杆菌,其宿主范围远大于其母体噬菌体(vB_BceS_LY1和vB_BceP_LY3分别仅能裂解其中的3株和2株)。裂解酶LysCA8和LysBA3在体外对供试的副溶血性弧菌无裂解活性,推测系环境适应性障碍及单域结构所致。针对革兰氏阴性菌裂解酶无活性的问题,未来将通过结构优化、分子伴侣共表达及嵌合酶设计,揭示失活机制并拓展裂解酶抗菌谱。

关键词： O型口蹄疫病毒   146S   单克隆抗体   双抗体夹心ELISA  

摘要： 本研究通过制备O型口蹄疫病毒(FMDV)OHM/02株单克隆抗体(MAb),建立了针对完整病毒颗粒(146S)的快速检测方法,用于评价口蹄疫灭活疫苗的抗原含量。以纯化的FMDV OHM/02株病毒粒子为免疫原,通过杂交瘤技术获得84株杂交瘤细胞,进一步筛选得到4株抗OHM/02株的特异性抗体,包括1株可特异性识别目标病毒完整146S颗粒的MAb 3C5。抗体分型结果显示,MAb 3C5重链为IgG2a,轻链为κ型。Western blot与IFA鉴定结果显示,Mab 3C5仅与OHM/02株完整146S产生特异性结合。以MAb 3C5同时作为包被抗体和酶标抗体,建立了FMDV OHM/02株146S的双抗体夹心ELISA快速检测方法。该方法的最优反应条件为:以0.01 mol/L pH 7.4的PBS作为包被液,包被MAb 3C5的浓度为1 μg/mL,酶标抗体HRP-3C5稀释比例为1:4000,封闭条件为1% BSA/PBS于2~8℃作用16~24 h。双抗体夹心ELISA的检测线性范围为15.625~1000 ng/mL(R2= 0.998),该方法与FMDV其他毒株及培养过程相关液体之间均无交叉反应,组内和组间变异系数(CV)均低于5%,且经单因素方差分析,其检测结果与蔗糖密度梯度离心法无显著差异(F < F crit,p> 0.05),表明其具有良好的特异性、重复性与准确性。此外,该方法检测的抗原含量与攻毒保护试验PD50值呈显著正相关(r=0.96,p< 0.01)。综上所述,本研究建立的双抗体夹心ELISA可用于FMDV OHM/02株灭活疫苗的抗原含量评价,为该疫苗的抗原定量提供了标准化、高通量的质量控制监测方法。

关键词： 昆虫   基因组   环境适应性   进化   群体基因组学   比较基因组学   泛基因组学  

摘要： 随着测序技术的快速发展,基因组学及相关多组学技术已被广泛应用于物种适应性进化机制研究。昆虫因其生命周期短、繁殖速度快等生物学特性,成为研究环境适应性进化机制的理想模型。本文首先论述了基因组学在生物进化研究中的发展背景,继而阐述了昆虫在进化机制研究中的独特优势;重点评述了比较基因组学、群体基因组学、泛基因组学以及基因编辑技术在解析昆虫抗药性、迁飞扩散与耐寒性等环境适应性演化机制中的应用与突破,并以棉铃虫Helicoverpa armigera的杀虫剂抗性相关的CYP9A和谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因簇,草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda对杀虫蛋白Vip3 A的抗性机制及其“水稻型”和“玉米型”群体的全球分布及扩散路径,以及二化螟Chilo suppressalis、亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis和小地老虎Agrotis ipsilon等重要农业害虫在中国的种群演化与适应性分化机制为例进行说明;当前研究仍面临对非模式物种和表观遗传调控解析不足的局限,例如在端粒到端粒(telomere-to-telomere,T2T)完整基因组和泛基因组的构建方面相对滞后,多组学数据之间关联解析不足,难以从基因变异、转录调控到表型适应构建系统性和连续性的调控网络。展望未来,需通过系统整合多组学数据与发展更先进的功能验证技术,尤其是在非编码调控和表观遗传层面,更全面深入解析昆虫复杂的环境适应性演化机制。

关键词： 桑树   MaNAC90   干旱胁迫   功能分析  

摘要： 以‘德果1号’桑树(Morus alba‘Deguo 1’)为材料,克隆了1个NAC转录因子基因Ma NAC90,其开放阅读框为732 bp,编码243个氨基酸。MaNAC90蛋白分子量为27.436 kD,等电点为5.32,含有1个NAC保守结构域,与TERN亚族成员聚为一类,定位在细胞核和细胞膜。模拟干旱胁迫(200 mmol·L-1甘露醇)下,与野生型相比,过表达Ma NAC90的拟南芥的发芽率显著降低,根长显著变短,幼苗的萎蔫程度也更严重,MDA含量和电导率均显著升高,RD22和RD29B的表达水平显著下调。本研究结果初步表明MaNAC90在干旱胁迫响应中发挥负调控作用。

关键词： 重金属铬   单克隆抗体   免疫层析技术   试纸条  

摘要： 该文制备了重金属铬的单克隆抗体,并建立了彩色乳胶微球免疫层析快速检测方法。采用异硫氰酸酯法,分别与载体蛋白进行偶联合成完全抗原(免疫原和包被原),通过免疫小鼠制备特异性识别重金属铬的单克隆抗体(4G9)。结果表明,单抗4G9的半数抑制浓度(IC50)为21.9 ng/mL,与镉、铅、汞、砷、铜、铁、镍等重金属交叉反应率均小于0.3%。基于此,建立了重金属铬彩色乳胶微球免疫层析方法,优化了抗体用量、试纸条T线浓度、探针用量以及试纸条检测体系pH值。在最佳工作条件下,建立的彩色乳胶微球免疫层析试纸条对重金属铬的最低检测限(LOD)为0.95 ng/mL,线性范围为0.78~25 ng/mL;该试纸条在实际检测芦笋样本中的LOD为5.15 ng/mL,样本加标回收率为75.3%~119%,相对标准偏差均小于10%,可用于实际样品中重金属铬残留的快速检测。

关键词： 红枣多糖   提取方法   构效关系   生物活性   开发利用  

摘要： 红枣多糖作为重要的生物活性成分,因其具有抗炎、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、调节肠道微生物群等多种药理作用而受到广泛关注。然而目前红枣加工主要依赖传统方法,导致效率低下,提高红枣多糖的提取率以提升其在食品、医药等领域的应用具有巨大潜力。本文系统综述了红枣多糖的提取技术、生物活性及其在生产与应用领域的最新研究进展。在溶剂萃取、超声和微波辅助以及酶法助提等传统提取技术的基础上,概述了多技术联合提取、脉冲电场提取、亚临界水萃取和超高压萃取4种新兴提取方法。从单糖组成、糖苷键和侧链基团、分子量及高级结构特性等方面探讨了红枣多糖结构与生物活性之间的构效关系;介绍了红枣多糖在食品、医药、化妆品及采后保鲜等方面的应用潜力,旨在为红枣多糖研究、拓展红枣产业链提供参考。

关键词： 油料作物   油莎豆   块茎   BCCP   亚细胞定位   表达模式  

摘要： 油莎豆(Cyperus esculentus L.)是迄今唯一已知在地下块茎中高水平积累油脂的新兴油料作物。研究从油莎豆中克隆到一个异质型乙酰辅酶A羧化酶生物素羧基载体蛋白(biotin carboxylase carrier protein,CeBCCP)亚基的编码基因。序列分析显示,CeBCCP的编码区全长819 bp,编码272个氨基酸,等电点8.49,总平均疏水指数为-0.147,属于碱性亲水蛋白;蛋白含有1个保守的生物素/脂酰结构域。亚细胞定位分析表明CeBCCP定位于叶绿体中;qRT-PCR分析显示该基因在根、匍匐茎、块茎、叶片、叶鞘、花和花茎等不同组织中均有表达,其中,在块茎中的表达量最高。综上,本研究首次报道了CeBCCP的序列特征、亚细胞定位及表达模式,这为解析油莎豆块茎油脂积累的分子机制及开展相关分子育种奠定了基础。

关键词： 裂谷热病毒   NSs   原核表达   蛋白纯化   多克隆抗体  

摘要： 为制备高效价、高特异性的裂谷热病毒((Rift Valley fever virus, RVFV)非结构蛋白NSs多克隆抗体,并评估其应用价值,本研究采用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化了RVFV NSs重组蛋白。以该纯化蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,成功获得了抗NSs多克隆抗体。经间接ELISA检测,该抗体效价达1:512000以上;Western blot及间接免疫荧光实验结果显示,所获抗体能同时特异性识别原核和真核系统表达的NSs蛋白,表明其对变性及天然构象的NSs蛋白均具有良好的反应特异性。综上,本研究成功制备了高效价、高特异性的RVFV NSs小鼠多克隆抗体,为深入研究NSs蛋白的亚细胞定位、在病毒感染致病过程中的功能以及筛选抗病毒药物靶点提供了关键工具。