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关键词： 核苷酸   抗噬菌体防御   流产感染   环状核苷酸   核苷酸耗竭   核苷酸脱氨  

摘要： 细菌与噬菌体之间的军备竞赛驱动了多种抗噬菌体防御系统的演化。近年来，一系列以核苷酸为核心的防御机制被相继发现，揭示了作为生命代谢基本分子的核苷酸，也是细菌免疫系统中的关键信号载体、效应底物和毒性武器。本文根据防御机制与核苷酸的相互作用方式，系统综述了7种代表性抗噬菌体系统，并将其归纳为三大类别：(1) 作为信号分子发挥功能的系统[如基于环状寡核苷酸的抗噬菌体信号系统(cyclic oligonucleotide-based antiphage signaling system， CBASS)、Pycsar(pyrimidine cyclase system for antiphage resistance)系统、Panoptes系统]，它们通过核苷酸环化酶合成环状寡核苷酸第二信使，激活下游效应蛋白引发流产感染；(2) 核苷酸耗竭引起宿主流产感染的系统[如脱氧胞苷三磷酸脱氨酶(deoxycytidine triphosphate deaminase， dCTP deaminase)及脱氧鸟苷三磷酸酶(deoxyguanosine triphosphatase， dGTPase)、Nezha系统]，通过特异性水解或修饰dNTP或NAD?，导致核苷酸失衡与能量危机，阻滞噬菌体复制；(3) 核苷酸异常转化介导的系统[如基于RNA腺苷脱氨酶的限制系统(restriction by an adenosine deaminase acting on RNA， RADAR)、三型CRISPR-Cas关联脱氨酶(type III CRISPR-Cas-associated deaminase， CAAD)]，通过将正常核苷酸转化为具有毒性的类似物[如肌苷三磷酸(inosine triphosphate， ITP)、脱氧肌苷三磷酸(deoxyinosine triphosphate， dITP)]，有毒的代谢物诱导流产感染。本文重点阐述了各系统的核心组分、蛋白结构特征、组装机制及抗噬菌体调控策略，并探讨了噬菌体针对上述系统的逃逸机制。综合表明，核苷酸稳态调控已成为细菌免疫的核心策略之一，对这些系统的深入研究不仅有助于揭示原核生物与噬菌体共进化的分子基础，也为开发新型抗菌策略和合成生物学元件提供了重要启示。

关键词： 鸟分枝杆菌   蛋白质组学   乙酰化胰蛋白酶   深度覆盖  

摘要： 鸟分枝杆菌（Mycobacterium avium）是一种重要的人畜共患非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria， NTM），其感染率持续攀升，已构成严峻的公共卫生挑战。然而，受限于参考基因组蛋白注释的不完善及标准菌株蛋白质组数据的缺失，该菌编码蛋白的表达特征尚不明晰。为了弥补基因组预测注释与实际蛋白表达之间的信息缺口，亟需在标准菌株层面获得系统、可靠的蛋白质实验证据，本研究对M. avium标准菌株DSM 44156T的全细胞蛋白与分泌蛋白，应用实验室自主研发的高活性乙酰化胰蛋白酶消化，结合高pH反相分级分离技术，进行质谱深度解析。研究共鉴定到3 655个非冗余蛋白质、32 917条肽段及91 744张谱图，覆盖了NCBI参考蛋白库中4 409个编码基因的82.90%，鉴定深度提升。全细胞与分泌蛋白组具有互补效应，共鉴定了2 445个蛋白质，且分别特异性鉴定了1 114和96个独有蛋白。本研究构建了全面、高精度的M. avium标准化蛋白质组图谱，不仅补充了该菌蛋白质的表达数据，更为深入揭示其致病机制、筛选新型诊断标志物与治疗靶点及制定NTM相关人兽共患病防控策略提供了关键的数据支撑。

关键词： 苹果   氨基酸硒肥   品质  

摘要： 富硒农产品因独特的营养价值和保健功能，已经成为消费市场与科研领域的关注热点。苹果作为全球范围内广泛消费的水果，对其进行富硒化栽培技术研究，提升苹果果实营养品质与商品价值具有重要的理论与实践意义。为探究叶面喷施氨基酸硒肥对‘弘前富士’苹果果实品质的影响的最佳施用浓度，本研究设置了5个浓度梯度：30、70、110、150、190 mg/m2，并以清水为空白对照，在苹果不同生长发育期进行叶面施肥处理。研究结果表明：当氨基酸硒肥喷施浓度为150mg/m2时，可有效改善‘弘前富士’苹果的果实品质，显著提高果实可溶性固形物、多酚和维生素C含量，同时显著降低果实酸度；同时，该浓度处理下果实中硒、钙、铁、铜、钾等矿质元素的积累量整体优于其他处理组，可进一步优化苹果的口感风味，提升果实营养品质。本研究结果可为富硒苹果优质栽培中的合理应用提供理论依据，对提升苹果的营养价值与种植经济效益具有重要参考价值。

关键词： 番茄   小热激蛋白   基因克隆   重组蛋白表达   叶绿体  

摘要： 【目的】对番茄（Solanum lycopersicum）SlHSP21-1/2基因进行原核表达，并制备和鉴定其多克隆抗体，为深入探究该基因的作用机制提供基础。【方法】以番茄为材料克隆获得SlHSP21-1/2基因的编码序列，并通过生物信息学分析预测其理化性质及亚细胞定位。设计特异性引物扩增目标基因片段，构建原核表达载体并转化入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞，通过IPTG诱导表达重组蛋白；表达产物经SDS-PAGE检测并采用Ni-NTA亲和层析纯化，将纯化后的蛋白用于免疫新西兰兔，多次免疫获得血清，并鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】生物信息学分析结果表明，SlHSP21-1/2蛋白具有典型的小热激蛋白结构特征，包括保守的α-晶体结构域和高度保守的N/C端区域；亚细胞定位预测结果显示，该蛋白主要定位于叶绿体。SDS-PAGE凝胶电泳显示SlHSP21-1/2融合蛋白成功表达，主要以包涵体的形式表达；经Ni-NTA亲和层析纯化后，获得的重组蛋白纯度较高，为免疫实验提供了可靠的抗原来源。利用该重组蛋白免疫新西兰兔获得的多克隆抗血清，在Western blot实验中能够特异性识别目标蛋白条带，表明所制备的多克隆抗体具有较好的特异性。【结论】成功实现SlHSP21-1/2基因的原核表达，并制备特异性较好的多克隆抗体。

关键词： 支气管肺发育不良   间充质干细胞   外泌体   工程化材料   水凝胶   氧化应激  

摘要： 背景:间充质干细胞及其外泌体可通过抗氧化、抗炎、促进血管新生和抑制肺纤维化等机制,有效缓解肺损伤,促进肺组织修复和功能重建,从而在一定程度上改善支气管肺发育不良的病程和预后。目的:综述间充质干细胞及其外泌体在支气管肺发育不良中的研究现状。方法:由第一作者检索中国知网、PubMed数据库,文献检索时限为各数据库建库至2025年3月,以“间充质干细胞,外泌体,支气管肺发育不良,纳米水凝胶,作用机制”为中文检索词,以“mesenchymal stem cells,exosomes,bronchopulmonary dysplasia,nanohydrogels,mechanism of action”为英文检索词,最终选取符合标准的85篇文献进行综述。结果与结论:①间充质干细胞及其外泌体可介导多种治疗机制,包括缓解氧化应激反应、促进血管生成与血管修复、抑制肺纤维化进程、抗细胞凋亡、调节细胞自噬、参与免疫调节、炎症反应抑制等,在支气管肺发育不良防治中展现出良好的应用前景,有望成为该病的重要治疗策略之一。②在传统给药方式下,间充质干细胞及其外泌体难以在肺部实现长期滞留,从而限制了对受损组织的持续修复能力。近年来,水凝胶等工程化生物材料的引入为此问题提供了新的解决思路。水凝胶不仅能够实现外泌体在肺组织中的缓释释放,还可在一定程度上使其免受肺内炎症微环境的影响,从而提升其生物稳定性和治疗效能。因此,基于水凝胶的干细胞及外泌体递送系统有望成为未来支气管肺发育不良治疗研究的热点方向。

关键词： 肌腱干细胞   miR-223-3p   低氧诱导因子1α   血管内皮生长因子   VHL   低氧环境  

摘要： 背景:低氧微环境是肌腱损伤修复的关键调控因素,但其通过miRNA介导的分子机制尚不明确。目的:探讨miR-223-3p在低氧条件下对肌腱干细胞生物学行为的调控作用及机制。方法:①将第3代大鼠肌腱干细胞分为对照组(体积分数21%氧气)、低氧组(体积分数1%氧气),培养48 h采用CCK-8实验检测细胞增殖情况,Muse细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,RT-qPCR及Western blot检测低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白及mRNA表达。②生物信息学预测miR-223-3p靶点,双荧光素酶实验验证miR-223-3p与VHL的靶向调控关系。③将第3代大鼠肌腱干细胞分为5组:常氧miR-223-3p mimics组、常氧mimics NC组、常氧inhibitor NC组、低氧inhibitor NC组、低氧miR-223-3p inhibitor组,常氧或低氧培养48 h采用RT-qPCR及Western blot检测低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、VHL蛋白及mRNA表达,CCK-8法检测细胞活力,Muse细胞凋亡检测试剂盒分析细胞凋亡率,划痕实验及Transwell小室实验评估细胞迁移与侵袭能力。结果与结论:①与对照组相比,低氧组肌腱干细胞活力显著降低(P<0.001),凋亡率显著增加(P<0.01);与对照组相比,低氧组肌腱干细胞中miR-223-3p、低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子mRNA表达显著升高(P<0.01);低氧组肌腱干细胞中低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白表达显著升高(P<0.01);②生物信息学预测VHL与miR-223-3p有潜在结合位点;双荧光素酶实验显示,miR-223-3p能够与VHL靶向结合;③功能实验显示,敲低miR-223-3p可上调肌腱干细胞中VHL mRNA和蛋白表达,下调低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达(P<0.01),提高肌腱干细胞活力,降低细胞凋亡率,促进细胞迁移及侵袭(P<0.01),过表达miR-223-3p则相反,且加剧低氧损伤,其机制可能与低氧诱导因子1α/血管内皮生长因子/VHL信号通路被激活相关。

关键词： 间充质干细胞   药物临床试验   药物临床试验登记和信息公示平台  

摘要： 目的探讨间充质干细胞(MSCs)相关临床试验的研究现状及未来趋势,为MSCs药物研发提供参考。方法检索国家药品监督管理局药物临床试验登记和信息公示平台建库至2025年9月25日MSCs相关临床试验,提取相关资料信息并进行归纳分析。结果共检索到MSCs相关临床试验65项,其中多中心研究43项(66.15%),招募样本总量3112例。申办单位及实施组长单位均集中在上海、北京、广东、浙江等经济发达、医疗资源丰富的省市。设计类型分为平行分组34项(52.31%)和单臂试验31项(47.69%),其中平行分组设计中有1项未选择随机化,33项随机化试验中有6项未使用盲法。试验分期以Ⅰ或Ⅱ期临床试验研究为主,共有60项(92.21%)。研究细胞类型主要为人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)41项(63.08%);主要适应证为膝关节骨性关节炎11项(16.92%)、移植物抗宿主病和缺血性脑卒中各7项(各占10.77%)。中国目前仅有1种MSCs疗法(艾米迈托赛注射液)获批上市。结论中国MSCs临床试验主要集中在经济发达、医疗资源丰富地区,且研究设计存在不足。试验细胞类型主要为UC-MSCs,主要集中在治疗膝关节骨性关节炎。目前多数研究仍处于Ⅰ或Ⅱ期临床试验阶段,尚缺乏确切的临床安全性和有效性数据,获批上市尚需时日。MSCs临床试验的未来发展应聚焦于“精准”与“增强型”疗法,并着力推动全产业链的成熟以及国际合作与协同监管。

关键词： 核酸适配体   蛋白质组学   质谱   SOMAScan   肿瘤检测  

摘要： 核酸适配体是利用指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技术经过体外筛选获得的ssDNA或RNA序列,能够特异性识别多种靶分子,如蛋白质、微生物、细胞、组织以及小分子等。蛋白质组学是从细胞或组织的整体水平上研究蛋白质组成及其功能的学科。结合凝胶电泳、质谱以及生物信息学等技术进行蛋白质的分离、鉴定和定量。该文首先介绍了核酸适配体和蛋白质组学在肿瘤检测中的应用。随后,重点阐述了近年来基于核酸适配体的蛋白质组学在肿瘤检测中的应用,特别是SOMAScan。最后,对核酸适配体与蛋白质组学的发展前景进行了展望,以期为肿瘤的早期诊断及靶向治疗提供新思路。

关键词： 间充质干细胞   体外培养   细胞衰老   预处理   培养环境   综述  

摘要： 背景:随着传代次数的增加,间充质干细胞在体外培养过程中表现出明显的功能衰退现象,这一局限性严重制约了其在临床治疗中的应用效果。近年来,得益于生物技术的突破性进展和生物工程材料的显著改良,已提出多种优化培养方案,但目前仍无规范化干细胞生产标准。目的:总结间充质干细胞在体外培养过程中出现的问题,简述间充质干细胞体外培养的优化方案。方法:以“间充质干细胞,体外培养,细胞培养,培养条件,预处理,细胞衰老”为中文检索词,以“mesenchymal stem cells,cell culture,in vitro,culture conditions,preconditioning,cell senescence”为英文检索词,检索中国知网、PubMed数据库于2025年1月之前发表的文献,排除与主题相关性较差、年代久远及重复的文章,最后纳入98篇文献进行综述。结果与结论:①总结了间充质干细胞体外培养时出现细胞形态学改变、增殖分化能力下降、迁移归巢能力下降、细胞代谢障碍、分泌衰老相关表型的问题;②梳理了间充质干细胞体外传代衰老的可能机制如遗传物质损伤、蛋白质稳态丧失、细胞内信号通路和转录因子表达改变;③总结了提高间充质干细胞体外培养效率的策略:基因工程修饰干细胞、药理学方法干预细胞增殖分化、优化干细胞体外培养环境、低氧预处理、调节细胞因子等。上述研究为提高间充质干细胞临床应用疗效提供了理论依据。

关键词： 细胞重编程技术   工程化细胞   工程化干细胞  

摘要： 包括细胞重编程技术、基因编辑技术、组织工程、干细胞分化机制、干细胞与免疫系统的相互作用以及合成生物学,并逐步向智能化、个性化医疗拓展。未来需要跨学科合作,个性化医疗、临床应用转化、智能化细胞、生物材料结合,突破技术瓶颈,同平衡创新与伦理规范等相关问题,其重点为基因编辑、组织工程、免疫调控及临床转化四大方向。