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关键词： 牛结节性皮肤病病毒   ORF122   单克隆抗体  

摘要： 旨在制备并鉴定牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF122重组蛋白及其单克隆抗体。选取ORF122蛋白膜外功能区(68~196 aa),构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化获得重组蛋白rLSDV122;以rLSDV122免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选分泌抗LSDV ORF122抗体的杂交瘤细胞株,对所得单克隆抗体进行亚型鉴定和间接ELISA效价测定,并采用免疫印迹和间接免疫荧光试验评价其对感染细胞中天然ORF122的识别能力及与常见牛源传染性病原体的交叉反应性。结果显示,成功获得相对分子质量约17 kDa的重组蛋白rLSDV122,以及2株IgG1/κ型单克隆抗体2D5和4H3,其间接ELISA终点效价分别为1∶128 000和1∶64 000。免疫学检测表明,两株单抗均能特异性识别LSDV感染MDBK细胞中的天然ORF122蛋白,且与多种牛源常见传染性病原体无交叉反应。综上,成功制备了针对LSDV ORF122的特异性单克隆抗体,为LSDV病原学研究及相关免疫诊断技术开发提供实验基础。

关键词： 坛紫菜多糖   纳米硒   抗衰老   肠道菌群  

摘要： 本研究旨在探讨坛紫菜多糖纳米硒(Porphyra haitanensis polysaccharide-stabilized selenium nanoparticles, SPS-SeNPs)对D-半乳糖(D-gal)诱导衰老小鼠肠道菌群及脑组织代谢的调控作用及其潜在机制。将60只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、维生素C阳性对照组及SPS-SeNPs低、中、高剂量组(1、2、4 mg Se/kg),除对照组外其余各组每日皮下注射D-gal(150 mg/kg)建立衰老模型,同时连续灌胃给药8周(48天)。实验结束后,检测血清及组织氧化应激指标,采用H&E和尼氏染色观察空肠、肝脏及海马体组织病理变化;通过16S rDNA高通量测序分析肠道菌群结构;结合非靶向代谢组学技术解析脑组织代谢谱变化。结果显示,SPS-SeNPs显著缓解D-gal诱导的氧化损伤:其中中剂量组(SM)血清超氧化物歧化酶(SOD)活性较模型组提升172.5%,丙二醛(MDA)水平降低23.5%,肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性恢复至正常水平(42.90 U/mg),并有效修复空肠绒毛结构,提升胸腺指数(P<0.05)。在神经保护方面,SPS-SeNPs显著抑制脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性(P<0.05),上调环鸟苷酸(cGMP)和γ-氨基丁酸(GABA)水平,改善海马神经元形态。菌群分析表明,SPS-SeNPs可富集益生菌属Lactobacillus(+56%)和Alloprevotella(+44%),部分恢复厚壁菌门/拟杆菌门(Firmicutes/Bacteroidetes)比值(P>0.05),并促进丁酸生成。脑代谢组学进一步揭示,SPS-SeNPs显著激活嘌呤代谢、苯丙氨酸生物合成及精氨酸代谢通路,提升次黄嘌呤与N-乙酰天冬氨酸等神经保护性代谢物水平。综上,SPS-SeNPs可通过协同发挥抗氧化、重塑肠道有益菌群及调控脑代谢网络等多重机制,有效缓解D-gal诱导的系统性衰老表型。本研究为基于“肠–脑轴”开发新型抗衰老功能性食品或营养干预策略提供了理论依据与实验支持。

关键词： 近红外光谱   棉籽粕   氨基酸   快速检测   模型构建  

摘要： 本研究旨在构建棉籽粕氨基酸在Foss和微型近红外仪光谱量化数据与实测值的关联模型,并对两种近红外仪预测模型进行比较,探讨利用近红外技术快速测定棉籽粕氨基酸的可行性。采集棉籽粕样品76个,利用湿化学法测定其17种氨基酸含量。将样品随机分成定标集(N=56)和验证集(N=20),分别利用FOSS XDS近红外光谱仪和Nir Smart Eye 1700微型近红外仪进行近红外光谱采集,构建各氨基酸定标模型,并进行外部验证。结果表明:1)FOSS XDS建模结果为:Asp、Thr、Glu、Gly、Lys、His、Arg和Trp的验证决定系数(RSQv)为0.840~0.887,所建定标模型适用于日常检测。Ser、Pro、Ala、Val、Ile、Leu、Tyr、Phe和Met的RSQv<0.840,验证效果不佳,模型不可用;2)Nir Smart Eye 1700建模结果为:Asp、Thr、Ser、Glu、Gly、Leu、Phe、Lys、His、Arg、Trp的RSQv为0.845~0.899,所建定标模型适用于日常检测。Pro、Ala、Val、Ile、Tyr和Met的RSQv<0.840,验证效果不佳,模型不可用。Nir Smart Eye 1700近红外仪对Ser、Leu、Phe的预测效果优于FOSS XDS近红外仪,但是两种仪器都仅对棉籽粕部分氨基酸含量快速测定是可行的。

关键词： 温度   獭兔   灵芝多糖   精液保存  

摘要： 在不同保存温度下,探究灵芝多糖在獭兔精液稀释液中的适宜添加浓度以及保存效果。在稀释液中加不同浓度(0.00 mg/mL、0.05 mg/mL、0.10 mg/mL、0.15 mg/mL)的灵芝多糖,将獭兔精液分别保存于恒温(37℃)、常温(20℃)和低温(4℃)环境中0 h、2 h、4 h、6 h后,对其精子活率、畸形率、质膜完整性、顶体完整性以及抗氧化指标包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)进行检测。结果显示,当添加0.10 mg/mL灵芝多糖时,低温和常温保存后獭兔精子的活率、顶体完整性和质膜完整性均显著提高(P<0.05),畸形率显著降低(P<0.05);当添加0.15 mg/mL灵芝多糖时,恒温保存后獭兔精子的活率、顶体完整性和质膜完整性均显著提高(P<0.05),畸形率显著降低(P<0.05);在恒温保存后,0.15 mg/mL添加组的SOD、GSH-PX、CAT活性和T-AOC显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);在常温和低温保存后,0.10 mg/mL添加组的SOD、GSH-PX、CAT活性和T-AOC显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。研究表明,在獭兔精液保存稀释液中添加0.10 mg/mL的灵芝后多糖后,其低温保存效果最好,建议在獭兔人工授精实践中可作为参考。

关键词： 肉鸭   屠宰性能   肉品质   氨基酸   脂肪酸  

摘要： 【目的】探究饲粮蛋白质水平和日龄对育成期小体型肉鸭屠宰性能、肉品质以及氨基酸、脂肪酸含量的影响。【方法】试验选择3 000只健康且体重相近的14日龄小体型公鸭(益扬1号),随机分为高蛋白饲粮组和低蛋白饲粮组,每组6个重复,每个重复250只公鸭,试验期42 d。42、49和56日龄时,从每个重复选择3只接近平均体重的试验鸭屠宰,测定其屠宰性能、肉品质以及氨基酸和脂肪酸含量。【结果】42、49和56日龄时,高蛋白饲粮显著促进了肉鸭的生长发育,宰前体重显著高于低蛋白饲粮组(P<0.05)。高蛋白饲粮组肉鸭胸肌、腿肌的pH1 h和pH24 h均显著高于低蛋白饲粮组(P<0.05),表明高蛋白饲粮组肉鸭的肉质更嫩。高蛋白饲粮组肉鸭胸肌中胶原蛋白含量显著高于低蛋白饲粮组(P<0.05),随着日龄增长(56日龄),胸肌中的脂肪含量显著高于42、49日龄(P<0.05)。高蛋白饲粮组肉鸭胸肌、腿肌中蛋白质含量,及56日龄时胸肌中氨基酸总量和部分氨基酸含量(异亮氨酸)显著低于低蛋白饲粮组(P<0.05)。饱和脂肪酸(硬脂酸)显著低于低蛋白饲粮组(P<0.05),但α-亚麻酸和二十二碳六烯酸含量显著高于低蛋白饲粮组(P<0.05)。不饱和脂肪酸含量升高,饱和脂肪酸含量下降,使肉具有芳香的风味,降低肉的硬度和油腻感。【结论】高蛋白饲粮有利于促进小体型肉鸭的生长发育,低蛋白饲粮有利于提高小体型肉鸭胸腿肌的营养价值,适当延长饲养时间都有助于改善小体型肉鸭胸肌的肉品质水平。

关键词： 拟南芥   二酰基甘油激酶   MsDGK5基因   盐胁迫  

摘要： 盐胁迫作为典型的非生物胁迫类型,已成为限制植物生长发育的核心因素之一。二酰基甘油激酶DGKs(Diacylglycerol kinases)是一种信号酶,可通过磷酸化DAG形成PA,在应对非生物胁迫过程中起关键作用。本文克隆了紫花苜蓿MsDGK5基因,构建了pCAMBIA3301-MsDGK5超表达载体,通过花序侵染法遗传转化拟南芥,获得过表达MsDGK5基因的拟南芥植株并进行功能验证。研究结果如下:MsDGK5基因的全长序列为1428 bp,可编码475个氨基酸;MsDGK5蛋白与蒺藜苜蓿MtDGK5蛋白亲缘关系最近;MsDGK5基因受到盐胁迫的显著诱导,在根中的表达量于处理后48 h升至最高;转MsDGK5基因拟南芥对盐胁迫的耐受能力明显增强,表现为过表达拟南芥的鲜重、存活率和总叶绿素含量均显著高于对照,相对电导率显著低于对照。结果表明MsDGK5基因过表达可显著增强拟南芥的耐盐性,该研究结果为系统解析紫花苜蓿MsDGK5基因功能及盐胁迫应答分子机制提供了重要理论依据,为紫花苜蓿耐盐遗传改良选育奠定了分子基础。

关键词： 波尔山羊   FGF1基因   基因克隆   细胞增殖   细胞迁移  

摘要： 【目的】克隆波尔山羊成纤维细胞生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGF1)基因编码区序列(CDS)并进行生物信息学分析,探究FGF1基因在波尔山羊干奶期与泌乳期组织表达规律及对HEK293T细胞增殖、迁移的影响,为波尔山羊创面修复技术开发提供依据。【方法】以波尔山羊心脏组织cDNA为模板,克隆FGF1基因CDS区并构建过表达质粒,利用MegAlign和Mega 11.0软件对克隆获得的波尔山羊FGF1基因核苷酸序列进行相似性分析和系统进化树构建,并结合在线软件分析FGF1蛋白生物信息学特征;利用实时荧光定量PCR检测FGF1基因在波尔山羊干奶期与泌乳期各组织中的表达水平;将构建的过表达质粒转染HEK293T细胞后,使用激光共聚焦显微镜观察FGF1蛋白亚细胞定位;采用CCK-8试剂盒检测过表达FGF1对HEK293T细胞增殖能力的影响;通过划痕试验和Transwell小室迁移试验评估过表达FGF1对HEK293T细胞迁移能力的影响;并利用Western blotting技术检测过表达FGF1的HEK293T细胞中ERK和AKT的磷酸化水平。【结果】波尔山羊FGF1基因CDS区全长468 bp,编码155个氨基酸。该基因核苷酸序列与绵羊的相似性最高(99.6%),与鸡的相似性最低(77.4%),在不同物种中具有高度保守性。生物信息学分析发现,波尔山羊FGF1蛋白为无信号肽、非跨膜的稳定亲水性蛋白,包含15个潜在磷酸化位点和2个O-糖基化位点。其二级结构以无规则卷曲(63.23%)和延伸链(25.16%)为主,三级结构与二级结构预测结果一致,主要互作蛋白包括FGFR1、FGFR2、FLT1、S100A13等。组织表达检测显示,FGF1基因在波尔山羊干奶期、泌乳期各组织中广泛表达,不同生理时期在心脏中表达量均最高,与泌乳期相比,干奶期波尔山羊肝脏、乳腺、脂肪、脾脏、肾脏、肌肉中基因FGF1表达量显著升高(P<0.05),而肺脏中表达量显著下降低(P<0.05)。FGF1蛋白主要定位于HEK293T细胞的细胞核。与对照组相比,过表达FGF1组的HEK293T细胞增殖能力和细胞迁移能力显著增强(P<0.05),且ERK和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆波尔山羊FGF1基因,明确了其序列特征及在干奶期的表达上调模式。过表达FGF1可通过激活ERK和AKT促进HEK293T细胞增殖与迁移。研究结果为进一步解析FGF1基因在波尔山羊组织稳态及修复中的作用提供依据。

关键词： 关键蛋白质   蛋白质序列   深度学习  

摘要： 针对传统方法依赖蛋白质相互作用网络而面临噪声干扰、泛化能力有限等问题,提出一种基于蛋白质序列信息与多源生物数据融合的预测模型PSG。该模型通过多尺度TextCNN从位置特异性得分矩阵中提取384维序列特征,利用全连接网络将1024维亚细胞定位信息压缩为64维特征,并采用双向长短期记忆网络从基因表达谱中生成64维动态特征;随后将三类特征拼接为512维全局特征表示,输入至深度多层感知机进行关键蛋白质分类。实验结果表明,PSG模型在敏感性、特异性、F1分数和准确率等指标上均优于10种中心性方法(DC、LAC、NC、EC、BC、CC、SC、PR、Pec、WDC)、8种机器学习方法(SVM、DT、KNN、RF、AdaBoost、XGBoost、LR、MLP)和4种深度学习方法(DeepEP、IBMI、MBIEP、ACDMBI)。消融实验进一步表明,序列特征是模型性能的关键因素,而序列、亚细胞定位与基因表达三类特征的融合则实现了最佳协同作用,显著提升了模型整体性能与鲁棒性。

关键词： 固始鸡   P2RX7基因   生物信息学分析   组织表达   原代卵泡颗粒细胞  

摘要： 【目的】克隆固始鸡嘌呤能受体P2X7(purinergic receptor P2X7,P2RX7)基因编码区(CDS)序列,并分析其编码氨基酸的生物信息学特征,进一步检测该基因在固始鸡不同组织中的表达水平及其对原代颗粒细胞凋亡的影响,为探究其生物学功能及作用机制提供参考。【方法】以30周龄固始鸡卵巢组织cDNA为模板,采用PCR克隆P2RX7基因CDS区并测序,对固始鸡及不同物种的P2RX7氨基酸序列构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测分析P2RX7蛋白理化性质及结构功能。采用实时荧光定量PCR检测P2RX7基因组织表达谱,构建过表达载体并转染鸡原代卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测凋亡相关基因的mRNA及蛋白表达水平。【结果】固始鸡P2RX7基因CDS区序列全长1 683 bp,编码560个氨基酸。系统进化树显示,鸡与鹌鹑聚为一个进化分支,在禽类中序列保守。鸡P2RX7蛋白含2个跨膜结构域,整体以亲水性区域为主,其二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲组成,三级结构预测结果与二级结构一致。蛋白互作网络显示,P2RX7蛋白与P2RX1/2/4/5、PANX1、P2RY6、NLRP3、ENTPD8L及LIPA等蛋白存在互作。P2RX7基因在固始鸡不同组织中均有表达,其中脾脏和肺脏中表达量较高,腿肌和胸肌中表达量较低。细胞试验结果显示,P2RX7基因过表达后,原代卵泡颗粒细胞中抗凋亡基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA和蛋白表达量均极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】成功扩增固始鸡P2RX7基因完整CDS区序列,其编码蛋白为跨膜蛋白,且该基因在禽类中具有较高保守性,同时该基因在固始鸡各组织广泛表达,能抑制鸡原代卵泡颗粒细胞凋亡。试验结果为进一步研究P2RX7基因在鸡繁殖性能中的分子机制奠定基础。

关键词： 中华按蚊   法尼酸甲基转移酶基因   基因克隆   分子特性   原核表达   表达模式  

摘要： [目的]本研究旨在克隆中华按蚊Anopheles sinensis法尼酸甲基转移酶(famesoic acid Omethyltransferase,FAMeT)基因,分析其分子特性并探究其在发育不同阶段及成蚊不同组织中的表达模式,为阐明该基因的生物学功能及信号通路作用提供理论依据。[方法]基于中华按蚊基因组数据克隆中华按蚊AsFAMeT的cDNA全长序列,对其编码蛋白质进行生物信息学分析。构建p Cold-TF-AsFAMeT重组质粒,转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白;镍柱纯化AsFAMeT重组蛋白并制备多克隆抗体,通过Western blotting检测抗体的特异性。利用RT-qPCR检测AsFAMeT在中华按蚊不同发育阶段(卵、1-4龄幼虫、雌雄蛹和雌雄成蚊)以及3日龄雌雄成蚊不同组织(头、胸、腹、马氏管、脂肪体、中肠、卵巢、精巢和体壁)中的表达量。[结果]克隆获得中华按蚊AsFAMeT cDNA全长序列(GenBank登录号:PV368360),开放阅读框长1 050 bp,编码349个氨基酸残基,预测蛋白质分子量为37.02 kD,等电点为4.64,无信号肽序列和跨膜结构域;中华按蚊AsFAMeT与冈比亚按蚊***和达林按蚊***的同源蛋白氨基酸序列一致性分别为77.71%和69.43%;制备的多克隆抗体能够特异识别AsFAMeT蛋白。AsFAMeT在中华按蚊发育不同阶段以及3日龄雌雄成蚊的各组织中均有表达,在4龄幼虫和雌雄蛹中均表达量较高。AsFAMeT在3日龄成蚊体壁、卵巢和精巢中的表达量显著高于在其他组织中,在马氏管和中肠中的表达量低。Western blotting蛋白定量结果与RT-qPCR结果基本一致。[结论]本研究成功克隆并原核表达中华按蚊AsFAMeT,制备的特异性多克隆抗体能够特异识别中华按蚊的AsFAMeT蛋白,探究了中华按蚊不同发育阶段和雌雄成蚊不同组织中该基因的表达谱,为深入了解AsFAMeT在中华按蚊生长发育和生殖调控中的分子机制提供了重要依据。