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关键词： 鲤   pparαa基因   克隆   表达  

摘要： 本研究克隆了鲤pparαa基因的cDNA序列，其开放阅读框为1 443 bp，编码480个氨基酸。其氨基酸序列具备PPAR家族的典型结构域，包括A/B区、C区即DNA结合结构域（DNA-binding domain，DBD）、D区和E/F区即配体结合结构域（Ligand-binding domain，LBD）。序列分析共识别出13个鲤特异性氨基酸位点，分布于A/B区（9个，含3个潜在磷酸化位点）、D区(1个)和E/F区（3个，含1个潜在磷酸化位点），这些位点可能参与PPARαa转录激活功能。系统进化分析表明，鲤PPARαa聚类到硬骨鱼的PPARαa分支，与团头鲂和草鱼的亲缘关系最近。组织分布结果显示，pparαa在鲤成鱼11种组织中均有表达，以肝脏中表达最高，肠道次之，而在眼、脾脏和肌肉中表达较低。胚胎发育表达分析提示pparαa的表达存在母源性及波动性特征，在肌肉效应期达峰值，而在该时期前后的神经胚和心脏形成期表达均较低。结合PPARα在脂代谢中的核心功能，推测pparαa在鲤胚胎肌肉效应期可参与能量需求转换。本研究为后续深入揭示鲤pparαa调控靶基因的分子机制奠定了基础。

关键词： 舞毒蛾   LdCYP6B5基因   生物信息学   基因表达   胁迫响应  

摘要： 【目的】舞毒蛾Lymantria dispar作为全球性重大林业害虫，其抗药性问题日益严重，亟需解析关键解毒基因功能，为绿色防控提供靶标。【方法】基于转录组数据，综合运用RT-PCR、生物信息学分析、实时荧光定量PCR及RNA干扰等技术，对细胞色素P450基因LdCYP6B5进行克隆、表达模式分析及功能验证。【结果】克隆获得舞毒蛾LdCYP6B5基因的CDS编码序列，全长1 491 bp，编码496个氨基酸。系统进化显示其与眼斑斑翅石蝇CYP（QFS21559.1）亲缘关系最近。表达谱分析表明，LdCYP6B5在幼虫期的表达具有明显的发育阶段特异性：在2龄起始后48 h（I2H48）和5龄起始后48 h（I5H48）显著高表达，而在7龄起始后48 h（I7H48）表达水平最低。在蛹期，该基因在雌性中的表达显著高于雄性。鱼藤酮胁迫下，LdCYP6B5的表达呈现典型的浓度与时间依赖性双相响应，表现为前期抑制、后期诱导。RNA干扰沉默该基因后，舞毒蛾幼虫对鱼藤酮的敏感性显著增强，死亡率（81.67%）较对照组（58.33%）显著升高。【结论】LdCYP6B5基因在舞毒蛾对鱼藤酮的解毒代谢中发挥关键作用，是潜在的抗药性相关基因和绿色防控靶标，为深入解析舞毒蛾抗药机制及开发靶向RNAi防控技术提供了理论支撑。

关键词： 氨基酸   可消化必需氨基酸评分   肉类烹饪   猪背最长肌   蛋白质品质  

摘要： 可消化必需氨基酸评分（DIAAS）于2011年建立，用于评定人类食物的蛋白质品质。然而，作为全球消费量最高的肉类，猪肉经烹饪后的蛋白质品质尚未通过该方法进行评价。本试验以生长猪为模型动物，测定生鲜猪背最长肌的DIAAS值，并探究3种不同热处理方式（烤箱烤制、煎炸、明火炙烤）对猪背最长肌氨基酸消化率和DIAAS值的影响。结果表明，生鲜、烤箱烤制和明火炙烤猪肉的组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸和缬氨酸的标准回肠消化率（SID）均显著高于煎炸猪肉（P<0.05）。生鲜猪肉组氨酸和苏氨酸的SID显著高于3种熟制工艺的猪肉（P< 0.05）。针对6个月～3岁婴幼儿计算的DIAAS值，明火炙烤猪肉和煎炸猪肉最高（P<0.05），生鲜猪肉最低（P<0.05）。烤箱烤制猪肉的DIAAS值显著高于酪蛋白（P<0.05）。对于3岁以上人群，明火炙烤猪肉、煎炸猪肉与酪蛋白的DIAAS值无显著差异，但三者DIAAS值均显著高于烤箱烤制猪肉，而烤箱烤制猪肉的DIAAS值又显著高于生鲜猪肉（P<0.05）。综上，猪肉的热处理可提高其蛋白质品质，但并非所有热处理方式均能实现同等程度的提升。

关键词： 唐古特白刺   多糖   肠道菌群   短链脂肪酸  

摘要： 目的 探究低分子量唐古特白刺多糖（Low-molecular-weight polysaccharide from Nitraria tangutorum Bobr.,NTP-L）对健康小鼠肠道微生态的正向调节作用。方法 连续14 d对健康小鼠灌胃（NTP-L,200 mg/kg）后采用组织学方法评估小肠黏膜结构、16S rDNA高通量测序法分析肠道菌群组成，并利用气相色谱法检测粪便中短链脂肪酸（SCFAs）含量。结果 组织学评估结果显示，NTP-L可增加小鼠回肠绒毛长度（P<0.05），并增加杯状细胞数量（P>0.05），改善肠道黏膜结构；16S rDNA测序结果显示，NTP-L可富集Rikenellaceae＿RC9＿gut＿group、Lachnospiraceae＿NK4A136＿group等潜在有益菌属（P<0.05）；气相色谱法检测结果显示，粪便中的SCFAs总含量升高（P<0.05），其中乙酸、丁酸、戊酸、异丁酸及异己酸含量增加（P<0.05）。结论 低分子量唐古特白刺多糖可通过改善肠道黏膜结构、调节肠道菌群组成并促进SCFAs生成，对健康小鼠肠道微生态产生正向调节作用。

关键词： 心肌损伤   鸢尾素   核转录因子-κB信号通路   脂多糖   实验研究  

摘要： 目的：基于核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨鸢尾素（Irisin）在脂多糖（LPS）诱导的心肌细胞损伤中的作用机制。方法：LPS作用于AC16细胞24 h构建体外心肌细胞损伤模型，并将AC16细胞分为Control组、LPS(128μg/mL)组、LPS+Irisin(LPS 128μg/mL+Irisin 20 ng/mL)组、Irisin(20 ng/mL)组。采用细胞活性检测（CCK-8）和DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）分别检测细胞增殖和凋亡；乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞死亡率；使用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位；通过蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果：与Control组相比，LPS组心肌细胞存活率降低（P<0.01），死亡率增加（P<0.001），可见凋亡细胞增多、线粒体膜电位显著下降，同时Bcl-2和NF-κB蛋白表达下调（P<0.01）,Bax、Caspase-3、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化NF-κB抑制剂（p-IκB-α）和TNF受体关联因子2(TRAF2)蛋白表达上调（P<0.01）。与LPS组相比，Irisin预处理后心肌细胞存活率升高（P<0.05），明显降低了细胞死亡率（P<0.01），凋亡细胞明显减少、线粒体膜电位恢复，同时上调Bcl-2和NF-κB的表达（P<0.05），下调Bax、Caspase-3、p-NF-κB、p-IκB-α和TRAF2的表达（P<0.05）。结论：Irisin能够通过抑制NF-κB通路改善LPS诱导的心肌细胞损伤。

关键词： 白花蛇舌草   多糖   乳腺癌   MDA-MB-231   异种移植瘤   凋亡  

摘要： 目的:探讨白花蛇舌草多糖对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:体外实验采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞超微结构变化,qRT-PCR检测凋亡相关基因表达,Western Blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。体内实验建立裸鼠MDA-MB-231移植瘤模型,通过灌胃给予白花蛇舌草多糖干预,定期测量肿瘤体积;检测血清MDA、SOD、GSH-Px水平;采用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:体外实验结果显示白花蛇舌草多糖可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达。体内实验结果显示白花蛇舌草多糖可抑制肿瘤生长,降低荷瘤小鼠血清MDA水平和肿瘤组织Bcl-2蛋白表达,升高荷瘤小鼠血清SOD、GSH-Px水平和肿瘤组织Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:白花蛇舌草多糖在体内外均能有效抑制人乳腺癌细胞生长,表明其可能成为乳腺癌治疗的潜在药物。

关键词： 黄花苜蓿   MfWRKY22   非生物胁迫   功能分析  

摘要： 【目的】探究MfWRKY22转录因子在黄花苜蓿（Medicago falcata）响应盐、干旱和低温胁迫中的作用，为进一步解析MfWRKY22调节植物适应非生物胁迫的分子机理提供理论依据。【方法】基于课题组前期盐、干旱胁迫黄花苜蓿转录组数据，利用RT-PCR和基因组步移技术分别克隆MfWRKY22基因及其启动子，并进行生物信息学、基因表达、亚细胞定位和转录激活分析，同时创制OE-MfWRKY22转基因拟南芥植株，在盐、干旱和低温处理10 d时观测植株的鲜重、根长和侧根数。【结果】MfWRKY22 CDS长度为1 017 bp，编码338个氨基酸，分子量为37.05 kD，理论等电点为5.65，定位于细胞核，具有转录激活活性，属于GroupⅡ亚家族。获得MfWRKY22启动子区1 888 bp序列，其含有响应盐胁迫、干旱胁迫、渗透胁迫、激素应答以及W-box顺式作用元件。MfWRKY22在根、茎和叶中均有表达，但在叶中的表达量最高，且盐、干旱和低温胁迫均可诱导其表达。盐、干旱和低温胁迫下，OE-MfWRKY22转基因拟南芥植株幼苗的鲜重、根长和侧根数均显著高于野生型植株。【结论】MfWRKY22属于WRKY转录因子GroupⅡ亚家族成员，其表达受盐、干旱、低温胁迫诱导，且在盐、干旱以及低温等非生物胁迫下，超表达MfWRKY22可促进转基因幼苗生长。

关键词： 西南鬼灯檠   糖基转移酶   基因克隆   酶活性分析   表达分析  

摘要： 目的:克隆西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.岩白菜素合成相关基因并分析其序列特征与表达情况。方法:本研究以西南鬼灯檠的c DNA为模板,克隆得到一条基因,对该基因进行测序及生物信息学分析,并构建蛋白表达载体将其导入大肠杆菌DE3进行蛋白表达。将该基因重组蛋白与4-氧甲基没食子酸和UDPG共同孵育并利用HPLC和MS检测产物。利用qRT-PCR方法检测该基因在西南鬼灯檠不同部位组织中的表达情况,通过分子对接技术进一步探究该酶在合成岩白菜素过程中的作用机制。结果:克隆出一条基因,编码451个氨基酸,蛋白相对分子质量为50 229.46,为亲水性蛋白,定位于细胞质,具有植物糖基转移酶GT-B折叠结构,该基因命名为RsCGT1。RsCGT1蛋白具有催化4-氧甲基没食子酸产生岩白菜素的功能,RsCGT1在西南鬼灯檠植株的根部表达量最高。分子对接结果显示,RsCGT1的关键催化残基His23和Asp119共同作用于底物去质子化进而催化底物糖基化反应。结论:该研究成功克隆得到一条西南鬼灯檠糖基转移酶基因RsCGT1,为进一步研究岩白菜素生物合成途径提供基因资源。

关键词： 中华腐生牛肝菌   染色体级别基因组   基因家族演化   腐生适应性   比较基因组学  

摘要： 牛肝菌目真菌多数为外生菌根共生种类，中华腐生牛肝菌Buchwaldoboletus xylophilus作为该目腐生型一珍稀物种，是全球第二种人工栽培的牛肝菌，在科研与产业上均具有重要价值，然而其基因组信息尚属空白。本研究利用PacBio测序技术结合Hi-C辅助组装，首次构建了中华腐生牛肝菌染色体级别的高质量基因组。该基因组包含12条染色体，总长度为30.13 Mb，GC含量为50.38%，重叠群N50达2.64 Mb，BUSCO完整度为98.5%；共注释到11 195个蛋白质编码基因。比较基因组学分析表明，中华腐生牛肝菌转座子含量(9.97%)显著低于共生型牛肝菌(如美味牛肝菌的TEs占比约39.5%)，提示其基因组在腐生策略下更为稳定。基因家族演化呈现“收缩-扩张”协同模式：收缩主要集中在细胞壁修饰、转录调控等互作相关功能；扩张则涉及环境感知、木质纤维素降解[如2OG-Fe(Ⅱ)氧化酶]及DNA修复等，适应于腐木分解生态位。CAZymes分析显示，该菌富含糖苷水解酶(GHs，42.33%)和辅助活性酶(AAs，14.88%)，具备高效降解植物细胞壁的能力；其次级代谢基因簇较少(25个)，反映其能量分配倾向于碳源获取。系统发育分析确认其隶属于牛肝菌科铜色牛肝菌亚科，分化于13.84–33.82百万年前。共线性比较揭示，牛肝菌目核心基因组虽保守，但约39%的基因存在非共线性分布及染色体重排，这些结构变异可能与不同营养方式的适应性分化相关。本研究首次系统解析了中华腐生牛肝菌基因组的适应性分子特征，为揭示真菌生态适应性进化机制，以及推动该物种的遗传育种与生物降解应用提供了理论基础与基因组资源。

关键词： 紫花苜蓿   AP2转录因子   BBM基因   生长发育   胁迫响应  

摘要： AP2亚家族转录因子属于AP2/ERF超家族，参与调节植物生长发育的各种生物学过程。然而，对紫花苜蓿AP2亚家族及BBM的研究未见报道。本研究基于紫花苜蓿全基因组数据，采用HMMER鉴定了10个AP2基因，其中仅有一个BBM基因，对10个AP2成员进行生信和表达分析。结果发现，AP2成员均属于不稳定、亲水的非分泌蛋白，理化性质多样，二、三级结构特异；基序分析显示，AP2基因具有保守性，含有特定的结构域，如仅BBM含有bbm-1结构域，同时含有生长发育、植物激素响应及生物和非生物胁迫响应的顺式调控元件，表明MsAP2成员具有调控植物生长发育和应对逆境胁迫的作用；表达模式分析表明，MsAP2在不同器官的表达具有多样性和特异性，具有调节紫花苜蓿生长发育的潜在功能。进一步克隆MsBBM基因，明确其编码蛋白定位于细胞核。研究结果为后续探究AP2亚家族基因在紫花苜蓿生长发育中的作用提供了参考依据，也为揭示MsBBM基因的功能提供了研究基础。