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关键词： 全能核酸酶残留   特征性肽段   高分辨质谱   超高效液相色谱-串联质谱法  

摘要： 建立了一种超高效液相色谱-串联质谱测定蛋白的定量方法,用于检测生物制品中全能核酸酶残留。通过高分辨质谱对酶解后的全能核酸酶肽段进行分析,筛选获得全能核酸酶的特征性肽段;通过质谱多反应监测模式,建立特征性肽段和蛋白含量之间的对应关系,并进行方法学验证。该方法在1~100 ng/mL浓度范围内线性良好,残留蛋白检出限为39.6 pg,定量限为198 pg;低、中、高三浓度水平的加标回收率为85.9%~111.4%,相对标准偏差(RSD)为1.7%~8.7%。该方法适用于生物制品中全能核酸酶残留的质量控制。

关键词： 灵芝   灵芝多糖   β-葡聚糖   结构   免疫调节  

摘要： 灵芝作为一种传统的食药用真菌,其主要活性成分灵芝多糖(GLPs)在免疫调节领域受到广泛关注。GLPs的分子量分布、支链度、构象特征及空间构型与其原料来源、提取分离工艺及纯化方式密切相关,并直接影响其生物活性。β-葡聚糖是GLPs中最常见的结构骨架,其可通过不同的糖残基支链连接形成多种空间构型,进而影响GLPs的免疫调节功能。GLPs通过调节固有免疫和适应性免疫发挥广泛作用。其可通过与模式识别受体(如TLR4、Dectin-1等)结合,激活NF-κB、MAPK、PI3K/Akt等关键信号通路,进而增强巨噬细胞吞噬功能,促进树突状细胞成熟,提高NK细胞的细胞毒活性,调节T、B淋巴细胞增殖与分化,并有效调控细胞因子、趋化因子、免疫球蛋白、补体等免疫分子的分泌。此外,GLPs还可通过调节肠道菌群组成及其代谢产物,影响宿主的“肠道菌群—免疫轴”,从而间接调控机体免疫反应。这种多途径、多靶点的免疫调节特性,使其持续成为研究热点。文章系统综述了GLPs的来源、结构与分子特征,重点探讨了其免疫调节作用机制,并对其在免疫调节方面未来的研究方向进行了展望。

关键词： 甘草发酵   甘草多糖   水提醇沉   抗氧化活性   自由基清除力  

摘要： 为了探讨不同菌种发酵甘草后对甘草多糖质量浓度及抗氧化活性的影响,利用酵母菌、米曲霉、黑曲霉分别对甘草进行不同天数发酵,根据发酵后甘草多糖质量浓度,分别选取最优发酵时间进行发酵后,提取纯化多糖并计算纯度,同时测定甘草多糖的体外抗氧化性。发酵后甘草的多糖含量经提取纯化后明显提高;发酵降低了甘草多糖质量浓度,酵母菌发酵甘草3 d、米曲霉和黑曲霉发酵甘草5 d后多糖质量浓度下降趋于平稳;DPPH和ABTS法测定抗氧化活性,未发酵组的清除率均显著低于酵母菌、黑曲霉和米曲霉发酵组(p<0.05)。甘草发酵后多糖质量浓度显著下降,根据多糖下降的趋势排序,黑曲霉发酵组>酵母菌发酵组>米曲霉发酵组,但是发酵后甘草多糖体外的抗氧化能力均有明显提高。

关键词： 荸荠多糖   低共熔溶剂   响应面优化   结构表征   抗氧化活性  

摘要： 采用超声辅助低共熔溶剂提取荸荠多糖,对提取工艺进行响应面优化;采用红外光谱法、离子色谱法等对其结构、组成进行分析,并测定其体外抗氧化活性。结果表明,DES溶剂选择摩尔比为1:2的氯化胆碱-DL苹果酸,优化工艺参数为:液料比15:1(mL/g)、DES含水率49%、提取温度80 ℃、提取时间30 min,在此工艺条件下测得荸荠多糖得率的平均值为25.27%。荸荠多糖提取物具有三螺旋结构,其单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖及少量葡萄糖醛酸,摩尔比为Ara:Gal:Glc:Glc-UA=0.341:1.124:8.495:0.04。在紫外吸收光谱中未有明显的蛋白质、核苷酸等杂质吸收峰,在红外吸收光谱中具有多糖典型特征峰。其对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基清除率分别达到63.30%(0.12 mg/mL)、79.41%(1.0 mg/mL)和80.43%(1.0 mg/mL),IC50分别为0.142、0.35、0.125 mg/mL,具有良好的体外抗氧化活性。

关键词： 踝损伤   HMGB1蛋白   组蛋白脱乙酰基酶类   抵抗素   疼痛   骨髓   水肿  

摘要： 目的:分析血清高迁移率族蛋白质B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、组蛋白脱乙酰酶3 (histone deacetylase 3,HDAC3)、抵抗素水平与踝关节周围损伤患者骨髓水肿和疼痛程度的关系。方法:180例踝关节周围损伤患者,根据MRI检查有无骨髓水肿,分为骨髓水肿组和无骨髓水肿组。采用ELISA法检测2组患者血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平,评价2组患者的疼痛程度,根据MRI矢状面上T2WI脂肪抑制序列高信号区确定骨髓水肿组患者的骨髓水肿范围。分析血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平与骨髓水肿的关系及其与骨髓水肿范围和疼痛程度的相关性。结果:骨髓水肿组血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平均高于无骨髓水肿组(t=10.518,P=0.000;t=8.213,P=0.000;t=10.497,P=0.000)。骨髓水肿组骨髓水肿范围(75.67±18.88) mm2,重度疼痛33例、中度疼痛45例、轻度疼痛12例;无骨髓水肿组,重度疼痛9例、中度疼痛42例、轻度疼痛39例;骨髓水肿组的疼痛程度重于无骨髓水肿组(Z=-5.287,P=0.000)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平均为踝关节周围骨挫伤骨髓水肿的危险因素[OR=3.169,95%CI(2.027,4.954);OR=3.548,95%CI(2.070,6.082);OR=2.735,95%CI(1.649,4.535)]。相关性分析结果显示,骨髓水肿患者血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平与骨髓水肿范围及疼痛程度均呈强正相关(r=0.726,P=0.000;r=0.779,P=0.000;r=0.758,P=0.000;rs=0.803,P=0.000;rs=0.762,P=0.000;rs=0.784,P=0.000)。无骨髓水肿患者血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平与疼痛程度呈弱正相关(rs=0.215,P=0.042;rs=0.208,P=0.048;rs=0.221,P=0.037)。结论:血清HMGB1、HDAC3、抵抗素水平是踝关节周围损伤骨髓水肿的危险因素,且其水平越高患者骨髓水肿范围越大、疼痛越严重。

关键词： 蛋白质化学合成   固相多肽合成   多肽片段连接   蛋白质编辑   骨架重构   片段替换  

摘要： 蛋白质是生命活动的主要执行者.精确解析和操控其结构与功能具有重要科学意义和应用价值.虽然生物重组表达蛋白质技术应用广泛,但在制备具有均一翻译后修饰、特定外源标记或非天然功能单元的蛋白质时仍面临许多挑战.自液相和固相多肽合成方法建立以来,随着自然化学连接、酶促连接等多肽片段连接方法的发展,研究者实现了许多中等至大分子量蛋白质的化学全合成或半合成.同时,利用遗传密码子扩展技术定点将非天然氨基酸引入蛋白质序列,进一步拓展了蛋白质的化学空间.近年来,随着多肽骨架重构反应和分裂内含肽体系的发展,研究者进一步在体外及细胞内实现了蛋白质主链原位编辑.本文以“从化学合成到主链编辑”为主线,总结了固相多肽合成、多肽片段连接、遗传密码子扩展及蛋白质编辑等方法学的最新进展,为蛋白质的精确构建提供参考,以推动蛋白质结构和功能研究.

关键词： 药食同源   多糖   抗肥胖   构效关系   未来展望  

摘要： 随着全世界对于慢病防治的关注度日趋增长,肥胖作为一种在慢病人群中占比极高的疾病引起大家高度警惕。药食同源物质自古以来就被广泛使用,而拥有丰富生物活性的多糖是其重要组分。在此背景下,本文全面阐述了抗肥胖药食同源多糖的制备工艺、结构特征、作用机制、构效关系、提升其抗肥胖能力的方法。由此发现,抗肥胖药食同源多糖常含有糖醛酸和复杂糖苷键,揭示了药食同源多糖抗肥胖机制主要涉及缓解炎症、调节脂质代谢、调节脂肪细胞转化、改善肠道菌群并促进短链脂肪酸产生。明确了多种单糖单元在维持机体脂肪稳态中的重要作用,阐明了药食同源多糖同时含有α-和β-糖苷键能极大提升其抗肥胖能力。并进一步深入探讨了提升药食同源多糖抗肥胖能力的技术手段,深刻阐述了药食同源多糖抗肥胖活性研究的局限性和未来可能的发展方向,以期充分展示相关研究的潜力和未来强烈需求。

关键词： 牛脂肪间充质干细胞   细胞焦亡   奶牛子宫内膜上皮细胞  

摘要： 旨在探讨奶牛脂肪间充质干细胞(bovine adipose-derived mesenchymalstem cells, bAD-MSCs)对奶牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)焦亡模型的影响及其相关机制。首先使用1 μmol·L-1的脂多糖(LPS)预处理BEECs 12 h后,用10 μmol·L-1尼日利亚菌素(Nigericin sodium salt, Nig)刺激2 h构建BEECs细胞焦亡模型。将MSCs和BEECs进行共培养48 h,通过qPCR检测细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1和GSDMD以及促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的转录水平,以评估bAD-MSCs对Nig诱导的BEECs细胞焦亡的影响。随后,采用Western blot分析细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及Cleaved GSDMD的表达情况。最后,通过ELISA试剂盒进一步验证促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平,从而全面确认bAD-MSCs对BEECs细胞焦亡模型的调控作用。qPCR试验结果显示MSCs共培养组的BEECs细胞焦亡模型中细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1和GSDMD以及细胞促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β受到显著抑制;Western blot结果显示相较于细胞焦亡模型组bAD-MSCs共培养组的BEECs中细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD和Cleaved GSDMD的表达显著降低(P<0.05);ELISA结果显示相较于细胞焦亡模型组bAD-MSCs共培养组的BEECs中细胞促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β显著降低。MSCs可以抑制奶牛子宫内膜上皮细胞中细胞促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β及细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD和Cleaved GSDMD的表达,抑制奶牛子宫内膜炎的发生,为临床上奶牛子宫内膜炎的防治提供了重要的参考价值。

关键词： 石斛   氨基酸组成   假鳞茎   花   营养评价   器官差异  

摘要： 采用酸水解法应用全自动氨基酸分析仪对30种常见食用石斛的假鳞茎与花进行氨基酸组成分析,结合聚类分析对营养品质进行综合评价。结果表明:30种食用石斛均含17种氨基酸,但含量具有显著的种间差异与器官特异性。花和假鳞茎中总氨基酸含量分别为35.66~75.10 、18.99~79.09 mg/g,花中平均总氨基酸含量较假鳞茎高23.6%;必需氨基酸在总氨基酸中的占比为48.45%~69.92%,多数种类优于FAO/WHO推荐模式,蛋氨酸与异亮氨酸含量普遍较高。报春石斛、铁皮石斛、束花石斛、兜唇石斛等7种石斛的总氨基酸和必需氨基酸含量高,花茎差异小,营养稳定性好;食用石斛花部营养价值普遍优于假鳞茎。聚类分析将30种石斛划分为高、中、低三类氨基酸积累型。

关键词： 皮肤损伤修复   干细胞裂解液   反复冻融法   超声波破碎法   成纤维细胞  

摘要： 目的:比较反复冻融法与超声波破碎法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果,筛选干细胞裂解液的最优制备方法。方法:将人皮肤成纤维细胞以1×10~5/ mL、1×10~6/ mL、5×10~6/ mL、1×10~7/ mL 4种密度重悬于生理盐水,分别采用反复冻融和超声波破碎法处理,通过BCA法检测细胞破碎率和蛋白质含量,筛选两种方法最佳制备条件;采用细胞划痕愈合实验、CCK-8法、Transwell实验分别检测人皮肤成纤维细胞划痕愈合能力、细胞活力、细胞迁移数,ELISA检测裂解液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)蛋白含量。结果:超声波破碎法最佳条件为细胞浓度5×10~6/ mL、超声处理5 min;反复冻融法最佳条件为细胞浓度5×10~6/ mL、冻融3次(45 min)。两种方法细胞破碎率无显著差异(P>0.05),超声波破碎法制备的裂解液总蛋白含量更高;两种方法制备的裂解液对人皮肤成纤维细胞活力的影响无显著差异(P>0.05),反复冻融法制备的裂解液能显著促进人皮肤成纤维细胞迁移、提升细胞划痕修复效率(P<0.05)。ELISA结果显示,反复冻融法制备的裂解液中VEGF、SCF蛋白含量显著高于超声波破碎法(P<0.05或P<0.01),EGF含量无显著差异(P>0.05)。结论:反复冻融法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果优于超声波破碎法。